鬼笔环肽篇：荧光标记下的细胞骨架
|
肌动蛋白是形成微丝的蛋白质家族。 由于它在真核细胞中的细胞内丰度，在微摩尔浓度范围内，所以肌动蛋是参与多蛋白质-蛋白质相互作用的蛋白。 鬼笔环肽的荧光衍生物已被证明在固定细胞和组织中的肌动蛋白丝以及在体外可视化单个肌动蛋白丝方面非常有用。荧光鬼笔环肽衍生物已经成为研究肌动蛋白骨架的重要工具。 鬼笔环肽是鬼笔毒素家族的主要代表，是一种从有毒的死帽蘑菇中分离出的双环七肽。 与单体 G-肌动蛋白相比，它对 F-肌动蛋白亚基之间的凹槽具有高亲和力。 与肌动蛋白抗体相比，鬼笔环肽的非特异性结合可以忽略不计，从而在细胞成像过程中提供小的背景和高对比度。 一旦与 F-肌动蛋白结合，鬼笔环肽将单体和微丝的平衡向微丝移动，并抑制 ATP 水解。 这种相互作用通过防止亚基解离来稳定肌动蛋白微丝，并通过降低临界浓度促进肌动蛋白聚合。 这些特征使鬼笔环肽衍生物成为可视化 F-肌动蛋白和细胞骨架有效的染色剂之一。 目前百萤可提供的鬼笔环肽系列产品可分为三种：1.未标记的鬼笔环肽（#5301）；2.生物素标记的鬼笔环肽（#23140）；3.荧光染料标记的鬼笔环肽。荧光染料标记的鬼笔环肽分为两种：①经典荧光染料标记（如：AMCA、荧光素、罗丹明等）；②iFluor 标记的鬼笔环肽。今天我们主要讲的是iFluor 标记的鬼笔环肽。
iFluor 标记的鬼笔环肽系列 iFluor 系列产品是美国AAT Bioquest 自主研发的全光谱覆盖的荧光染料。它可以与赛默飞的AlexaFluor系列产品媲美，并在大多数情况下荧光、信号、背景等方面都要优于AlexaFluor系列产品。iFluor标记的鬼笔环肽可以标记、识别和定量甲醛固定和透化的组织切片、细胞培养物或无细胞实验中的 F-肌动蛋白。
图示：A）用鬼笔环肽-iFluor 488染色（货号23115）染色的HeLa细胞的荧光图像，并使用配备FITC滤光片的荧光显微镜观察。将细胞固定在4％甲醛中，并与线粒体染料MitoLite Red FX600（货号22677）和Nuclear Blue DCS1（货号17548）染色；B）用鬼笔环肽-iFluor 514（货号23116）染色的HeLa细胞的荧光图像，并使用配备有TRITC滤光片组的荧光显微镜观察。固定的细胞用Nuclear Blue DCS1（货号17548）染色；C）用鬼笔环肽-iFluor 532（货号23117）染色的HeLa细胞的荧光图像，并使用配有TRITC滤光片组的荧光显微镜观察。固定的细胞用Nuclear Green DCS1（货号17550）染色；D）用鬼笔环肽-iFluor 647（货号23127）染色的HeLa细胞的荧光图像，并使用配备Cy5滤光片组的荧光显微镜观察。首先用线粒体染料MitoLite Green（货号22675）对活细胞进行染色。在4％甲醛中固定后，细胞用鬼笔环肽-iFluor 647标记，并用Nuclear Blue DCS1（蓝色，货号17548）染色。
表1：iFluor 鬼笔环肽系列产品
百萤生物是美国AAT Bioquest中国区域代理商，为您提供AAT Bioquest优质的产品、详尽的技术和前沿的资讯，欢迎来电咨询！
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
