钙离子荧光探针购买攻略（干货）

市场的钙离子荧光探针五花八门，如何选择钙离子荧光探针？需不需要买丙磺舒？免洗的和去除培养基的有什么区别？今天百萤就带您了解一下！

1.添加丙磺舒的作用是什么？

丙磺舒是一种细胞膜中的有机阴离子转运蛋白的抑制剂。当带AM的钙离子荧光探针进入细胞后，会被细胞内酯酶水解变成带负电荷的形式，准备与钙离子结合。但一些细胞系含有阴离子转运蛋白，它会将已经成为负电荷形式的钙离子荧光探针运到细胞膜外，如图中红圈处所示。当加入丙磺舒后，就会抑制探针的外泄，从而让探针在胞内发挥出百分百的作用。

当然，有一些产品，是不需要添加丙磺舒的，如Cal-520AM以及Calbryte520AM，这两个系列的产品性能非常强大，丙磺舒就成了非必须的选项了。下图对比了在添加和不添加丙磺舒的情况下，Calbryte 520和Fluo-4的染色表现。由图中可以看出，添加或者不添加丙磺舒，对Calbryte 520的作用不是特别明显，但添加丙磺舒对Fluo-4的作用是肉眼可见的。

下表是我们总结的绿色钙离子荧光探针的性能的对比。

2.免洗和去除培养基的区别是什么？

如图：左边为免洗探针染色后的细胞；右边为去除培养基探针染色后的细胞。

免洗的特点：它可以非常且显著降低荧光背景。

去除培养基的特点：在敏感目标和多路复用中使用效果比较好。

图注：1.用到的缓冲液：HHBS [Hanks' Buffer with 20 mM Hepes] ；非离子表面活性剂：Pluronic® F-127 ；阴离子抑制剂: 丙磺舒。2.如果需要去除培养基，请添加：Screen Quest 10X细胞染色缓冲液。3.孵育时间：30-60min并冷却至室温；4.去除培养基后，我们就可以得到对照组（右下角图）；5.添加ATP或药物；6.使用荧光显微镜/荧光酶标仪/流式细胞仪进行检测，得到终图片（左下角图）。

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