辣根过氧化物酶 (HRP) 和多聚 HRP

辣根过氧化物酶 (HRP) 是一种流行的酶，在分子生物学中广泛用于检测免疫复合物和生物靶标，如蛋白质、碳水化合物和核酸。 HRP 通常与抗体、链霉亲和素或其他蛋白质结合，用作基于探针的免疫测定应用的报告系统，包括 ICC、IHC、蛋白质印迹、原位杂交 (ISH) 和 ELISA。

百萤提供完整的 HRP 标记工具和偶联物产品组合，包括 HRP 和聚 HRP 抗体标记试剂盒、与链霉亲和素偶联的 HRP、二抗和有机小分子以及酶活性和定量测定试剂盒。我们还提供多种显色、荧光和化学发光 HRP 底物，以满足任何实验设计或仪器。

HRP - 一种强大的报告酶

HRP 作为酶报告系统的广泛采用主要是由于三个因素。首先，HRP 具有放大弱信号的能力，增强低丰度目标分子的可检测性。其次，与碱性磷酸酶 (~140 kDa) 等其他报告酶相比，HRP (~44 kDa) 的相对较小的尺寸进一步提高了细胞内对样品的渗透，减少了空间位阻，并大限度地减少了免疫反应性损失。第三，当与合适的底物一起孵育时，HRP 的高周转率和良好的稳定性能够快速产生强信号。

聚 HRP 偶联物

MegaWox polyHRP-链霉亲和素偶联物是一种酶标记物，由 HRP 杂聚物核和链霉亲和素组成。同样，MegaWox polyHRP-Protein A Conjugate、polyHRP-Goat Anti-Rabbit IgG Conjugate 和 polyHRP-Goat Anti-Mouse IgG Conjugate 是酶标记物，由 HRP 异聚体核心和蛋白质 A、GAR 或 GAM 作为靶标结合分子组成。此外，Buccutite Poly-HRP 抗体标记试剂盒能够将抗体直接标记到 HRP 聚合物上，从而产生具有高灵敏度和信噪比的偶联物。 Poly-HRP 偶联物非常适用于目标丰度低或样品量有限的应用。

Poly-HRP 偶联物的每个分子都含有大量 HRP（聚合辣根过氧化物酶），在每次结合事件中提供更高的酶活性，从而在常规检测应用中实现信号放大。该偶联物可用于多种分析，包括 ELISA、IHC、ICC、蛋白质印迹或 DNA/RNA 原位杂交。

常见的 Poly-HRP 偶联物应用

Poly-HRP-链霉亲和素偶联物几乎可用于任何生物素标记的产品，包括生物素化探针以及一抗和二抗。该偶联物特别适用于超灵敏 ELISA 应用，其中要求每毫升灵敏度达到皮克至亚皮克。或者，可以利用缀合物的信号增强来减少进行常规多步骤分析（例如 ELISA）时所需的处理步骤的数量和持续时间，而不会牺牲整体分析灵敏度。同样，通过避免使用标准亲和素-生物素系统所需的两步生物素化二抗和亲和素-生物素复合物 (ABC) 试剂步骤，采用一步法聚 HRP 偶联方法可以缩短 IHC 程序。

表1. MegaWox polyHRP 偶联物

可视化 HRP 和 Poly-HRP 偶联物

HRP 和聚 HRP 偶联物使用底物进行可视化，当使用过氧化氢被 HRP 氧化时，会产生可量化的信号。它们是各种 HRP 底物，这些底物分为三大类：显色底物、荧光底物或化学发光底物。

1. 比色底物产生可见的颜色变化，可以使用吸光度酶标仪进行测量。虽然它们对于 HRP 检测来说容易使用且经济实惠，但显色底物的灵敏度不如荧光或化学发光底物。它们是目标丰度高的应用的理想选择。
2. 荧光底物会产生高荧光副产物，可以使用任何荧光仪器进行测量。提供比比色基材更高的灵敏度。
3. 化学发光底物会产生可使用光度计测量的发光副产物。由于光子的发射来自化学反应而不是光激发，因此没有背景干扰。

表2. 比色法、荧光法和化学发光 HRP 底物

Buccutite HRP 和 Poly-HRP 抗体标记试剂盒

Buccutite 过氧化物酶 (HRP) 抗体标记试剂盒使研究人员能够在不到 2 小时的时间内用 HRP 标记抗体。整个标记过程在两个简单的混合步骤中完成，无需后续的柱纯化。 Buccutite HRP 偶联物是各种免疫测定应用的理想选择，包括 ELISA、IHC 和蛋白质印迹，并且对于长期储存非常稳定。 Buccutite 过氧化物酶抗体标记试剂盒提供三种尺寸，针对每个标记反应标记 25 µg、100 µg 和 1 mg 抗体进行了优化。

对于需要更高灵敏度的应用，我们提供 Buccutite Poly-HRP 抗体标记试剂盒。这些试剂盒能够将抗体直接标记到 HRP 聚合物上，从而产生具有高灵敏度和信噪比的偶联物。 Poly-HRP 偶联物非常适用于目标丰度低或样品量有限的应用。

图 1. Buccutite 过氧化物酶 (HRP) 抗体标记试剂盒工作原理

Buccutite HRP 和 Poly-HRP 抗体标记试剂盒的主要特点：

1. 可以有效且记低至 100 µg/mL 的抗体浓度（SMCC 至少需要 1 mg/mL）
2. 标记抗体可在 2 小时内准备就绪，只需约 15 分钟的手动操作时间
3. 一个简单的两步混合方案减少了批次间的差异
4. 无需柱纯化步骤
5. 缀合产率
6. 缀合物可长期储存（4 °C，12 个月）
7. 缀合物可用于 ELISA、IHC、印迹、PSA信号放大和 TSA 成像
8. 实验设计灵活，HRP 偶联物与比色、荧光和化学发光底物兼容

表3. Buccutite 过氧化物酶抗体标记试剂盒设计用于用 HRP 和聚 HRP 标记抗体。

Power Styramide 信号放大 (PSA™) 技术

Power Styramide 信号放大 (PSA ) 是一种基于催化报告基因沉积 (CARD) 的高灵敏度技术，常用于检测 IHC、ICC 和 ISH 应用中遇到的低丰度目标。该技术在原位 HRP 催化下将苯乙烯酰胺沉积到感兴趣的目标分子（蛋白质、碳水化合物或核酸）上并与其直接相邻。在低浓度过氧化氢存在下，HRP 将标记的苯乙烯酰胺底物转化为高活性物质，该物质与 HRP 附近蛋白质上的可接近酪氨酸残基共价结合。这会产生高浓度的苯乙烯酰胺标记，从而使该系统对低丰度目标具有极高的灵敏度。

Power Styramide 探针可用 iFluor Styramide 染料标记，是 Alexa Fluor® tyramide 染料的替代品。它们还可与多种半抗原偶联，包括生物素、DNP、氯霉素、磺胺噻唑、西诺沙星、芬太尼、达诺沙星、AOZ 和 DIG。对于多色检测应用，可以使用不同的苯乙烯酰胺试剂盒进行多轮苯乙烯酰胺信号扩增。通过遵循 PSA™ 沉积步骤并在多重荧光 IHC 中去除抗体，PSA™ 促进了低丰度目标的检测，并另外简化了抗体组的选择。

图 2. 使用 iFluor PSA 成像试剂盒对甲醛固定、石蜡包埋的人肺腺癌进行连续免疫染色。

表4. iFluor PSA 成像试剂盒