谷胱甘肽（GSH和GSSG）

谷胱甘肽（GSH）是由三种氨基酸组成的三肽：L-半胱氨酸、L-谷氨酸和甘氨酸。它参与蛋白质二硫键的形成和维持、氨基酸跨细胞膜的转运以及解毒。由于谷胱甘肽含有一个巯基，它是细胞内主要的内源性抗氧化剂，通过中和自由基和过氧化物等活性氧物种来防止损伤。检测生物样品中的还原和氧化谷胱甘肽是评估细胞和组织的氧化还原和解毒状态以对抗氧化和自由基介导的细胞损伤的有用工具。

Amlite 荧光谷胱甘肽检测

Amlite 荧光谷胱甘肽检测是一种灵敏的一步式荧光检测方法，可检测 100 µL 检测体积中低至 1 皮摩尔的 GSH。 该检测采用专有的非荧光和 pH 依赖性谷胱甘肽探针，该探针在与硫醇反应时会发出强荧光。 该测定可以方便的 96 孔或 384 孔微孔板进行，并且无需分离步骤即可轻松适应自动化。使用荧光酶标仪在 Ex/Em = 490/520 nm 处可以轻松检测荧光信号。

图 1. GSH 剂量反应是在 96 孔黑色固体板上使用 Amlite 荧光谷胱甘肽检测试剂盒（货号 10055）检测的。 孵育 10 分钟即可检测到低至 10 nM（1 pmol/孔）的 GSH。

 
谷胱甘肽 GSH / GSSG 比率

在健康细胞和组织中，谷胱甘肽以两种状态存在，还原态 (GSH) 和氧化态 (GSSG)。 在还原状态下，谷胱甘肽是一种主要的组织抗氧化剂，可中和活性氧。 由于提供电子，GSH 本身变得具有反应性，并且很容易与其他反应性 GSH 分子反应形成 GSSG。 此外，还原的 GSH 为谷胱甘肽过氧化物酶 (GPx) 催化的脂质氢过氧化物还原为其相应的醇和过氧化氢还原为水提供还原当量。 在GPx催化反应中，两个GSH分子之间形成二硫键形成GSSG。 谷胱甘肽还原酶 (GR) 将 GSSG 再循环为 GSH，同时氧化 β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 (β-NADPH2)。

检测还原型 GSH 及其与氧化型 GSSG 的比率可用于评估细胞和组织的氧化还原和解毒状态，以及谷胱甘肽对氧化和自由基介导的细胞损伤的保护作用。在正常条件下，哺乳动物细胞中 GSH 氧化还原对的浓度范围通常为 1 – 10 nM，静息细胞的 GSH:GSSG 摩尔比超过 100:1。 当细胞暴露于更高水平的氧化应激时，GSSG 会积累，并且 GSH/GSSG 的比率降低至 10:1 甚至 1:1 的比率。 因此，检测生物样品中的 GSH/GSSG 水平已成为评估细胞和组织的氧化应激以及自由基引起的细胞损伤的有用工具。

Amlite 谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率测定

Amplite 荧光谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率测定和 Amplite 快速荧光谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率测定试剂盒是简单且超灵敏的测定，可在 100 µL 测定体积中定量低至 1 皮摩尔的 GSH（或半胱氨酸）。 每个试剂盒都使用专有的非荧光探针，在与 GSH 反应时会发出强荧光，并且可以使用荧光酶标仪在 Ex/Em = 490/520 nm 处检测其信号。 检测可以在方便的 96 孔或 384 孔微孔板进行，并且无需分离步骤即可轻松适应自动化。 这些测定的不同之处在于探针的溶解度。 Amlite 荧光谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率测定使用可溶于 DMSO 的探针 Thiolite Green。 Amlite 快速荧光法谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率测定使用水溶性探针 Thiolite Green 520WS。

图 2. GSH 和总 (GSH + GSSG) 剂量反应是用 Amlite 荧光谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率测定试剂盒测量的。 蓝线：仅存在 GSH。 红线：存在 1:1 GSH/GSSG。

表1. Amplite 谷胱甘肽试剂盒产品的订购信息