DNA 和 RNA 定量

准确的核酸定量是 DNA 和 RNA 样品制备中必不可少的步骤，并且经常有助于各种下游分子实验的成功（或失败）。通常用于量化 DNA 和 RNA 的方法包括吸光度 (UV-Vis) 检测、荧光检测和实时聚合酶链反应 (qPCR)。虽然每种方法都有其优点，但选择正确的技术可以节省大量时间和，并且主要取决于实验需要和预期的下游应用。

为了核酸定量，百萤提供各种产品，包括手持式荧光仪、用于 DNA 或 RNA 浓度荧光检测的 Helixyte 和 Portelite 试剂盒，以及用于基于 qPCR 的定量的 DNA 结合染料和探针。

吸光度与荧光核酸定量

传统上，DNA 和 RNA 浓度是通过 UV-VIS 分光光度法测量光吸收来量化的。在 260 nm 处测量吸光度，DNA 和 RNA 在该处吸收光强，总核酸浓度使用特定的转换因子确定。此外，在 230、280、320 或 340 nm 处进行的检测可用于检测非核酸染色，例如蛋白质、有机材料和其他干扰化合物。虽然吸光度法的优势在于其简单性、检测能力以及提供样品纯度信息，但它们无法区分 DNA 或 RNA，因为两者都吸收 260 nm 的光。

荧光的定量方法使用选择性结合双链 DNA、单链 DNA 或 RNA 的荧光染料，例如 Helixyte Green dsDNA、Helixyte Green ssDNA 或 StrandBrite Green RNA 染料，可实现更高灵敏度和特异性。由荧光计检测的荧光信号与样品中存在的核酸量成正比，并且由于荧光染料以高度特异性的方式结合。这两种方法之间的主要区别在于，通过荧光定量是一种间接方法，因此需要在定量前从已知浓度的标准样品中生成校准曲线。

表1. 吸光度和基于荧光的核酸定量方法的比较

定量溶液中的核酸

百萤提供广泛的高灵敏度核酸染料和荧光的检测试剂盒，以量化溶液中的核酸。 Helixyte Green dsDNA 试剂、Helixyte Green ssDNA 试剂和 StrandBrite Green RNA 试剂 - 分别针对双链 DNA、单链 DNA（例如寡核苷酸）和 RNA 进行了优化 - 选择性结合并对其具有高亲和力感兴趣的核酸靶标。这些染料在结合核酸时荧光强度很高，能够快速检测复杂溶液中的低浓度核酸，而不受其他生物分子的干扰。 Portelite 定量试剂盒是在使用 CytoCite BG100 和 Qubit 荧光计对 ssDNA、DNA、RNA 或总核酸浓度进行高灵敏度和选择性定量。每个 Portelite 检测均采用靶标选择性核酸染料、即用型缓冲液、DNA 标准品和优化方案专门配制，允许使用简单的混合读取格式进行准确和直接的定量。

Helixyte Green DNA 定量试剂盒以及独立试剂

Helixyte Green 系列检测试剂盒和独立试剂用于使用标准荧光酶标仪简单、准确和灵敏地检测溶液中的 ssDNA、dsDNA 或总核酸浓度。每个 Helixyte 检测试剂盒均采用目标选择性 DNA 染料、即用型缓冲液、预稀释的 DNA 标准品和优化方案专门配制，可在各种浓度范围内进行准确定量，同时将常见污染物的干扰降至低。与吸光度测量不同，这些测定在较宽的线性检测范围内灵敏度高几个数量级，非常适合使用 96 孔或 384 孔板进行高通量定量。 Helixyte Green 荧光 dsDNA 定量试剂盒可用于检测复杂溶液中低至 25 pg/mL 的 dsDNA，使其成为定量基因组 DNA、病毒 DNA、小量 DNA、PCR 扩增产物和其他需要少量 DNA 的应用。

图1. 使用 Helixyte Green 荧光 dsDNA 定量试剂盒*高灵敏度*（蓝色）与 Quant-iT PicoGreen® dsDNA 检测试剂盒（红色）的 dsDNA 剂量反应比较结果图。

 

 

 

表2. 用于荧光酶标仪的 Helixyte Green 荧光 DNA 定量试剂盒

表3. Helixyte Green DNA 定量试剂的选择指南

用于 CytoCite BG100 和 Qubit® 荧光计的 Portelite 核酸定量试剂盒

Portelite 荧光定量试剂盒针对 CytoCite BG100 荧光计进行了优化，旨在选择性定量总核酸、DNA（ssDNA、dsDNA）和 RNA，提供比基于紫外吸光度的同类仪器更灵敏的分析。上述试剂盒适用于多种常见的生物学应用，包括克隆、测序、转染、qPCR 和凝胶电泳。所有检测均使用相同的通用方案进行，提供了一种简单的混合读取检测格式，可大限度地减少手动操作时间。每个 Portelite 试剂盒都包含浓缩的检测试剂、稀释缓冲液和预稀释的标准品。每个试剂盒中的荧光探针具有相似的光谱特性，可激发蓝光 (480 nm)，发射波长介于 510 nm 和 580 nm 之间。 Portelite 荧光测定试剂盒专为与 CytoCite BG100 荧光计一起使用而开发，但也可用于其他市售的微型荧光测定仪，例如 Qubit® 荧光计。除了上述 Poretelite 定量试剂盒外，我们还提供用于定量内毒素和蛋白质的 Portelite 试剂盒。

Poretelite 荧光定量试剂盒的优势：

1. 增强的选择性——检测利用选择性结合 ssDNA、dsDNA、总核酸或 RNA 的目标特异性染料
2. 高灵敏度 - 仅需 1 µL 样品即可进行定量
3. 宽动态范围 - 基于荧光的检测具有 4 到 5 个数量级的线性动态范围（10 pg/µL 至 1 µg/µL DNA）

图 2. 使用 Portelite 荧光 DNA 高灵敏度定量试剂盒（货号 17661）生成的 DNA 标准曲线。

表4. Portelite 荧光核酸定量试剂盒，用于 CytoCite 和 Qubit® 荧光计