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Caspase家族
细胞凋亡早期阶段的一个显著特征是半胱天冬酶的。 半胱氨酸——天冬氨酸特异性蛋白酶 caspase (CED-3/ICE) 家族的成员，已被确定为与细胞凋亡相关的复杂生化事件的关键介质。 caspase 的识别位点由三到四个氨基酸标记。 半胱天冬酶蛋白酶通常作为无活性前体合成。
图1.半胱天冬酶敏感的肽片段掩蔽氨基染料然后被半胱天冬酶消化以产生高度荧光染料。 荧光强度增加与半胱天冬酶活性成正比。
表1：人半胱天冬酶功能分类
| 细胞死亡途径 |
Caspase类型 |
caspase酶 |
所属生物 |
| 细胞凋亡 |
起始因子 |
Caspase 2 |
人或鼠 |
| 细胞凋亡 |
起始因子 |
Caspase 8 |
人或鼠 |
| 细胞凋亡 |
起始因子 |
Caspase 9 |
人或鼠 |
| 细胞凋亡 |
起始因子 |
Caspase 10 |
人 |
| 细胞凋亡 |
效应因子 |
Caspase 3 |
人或鼠 |
| 细胞凋亡 |
效应因子 |
Caspase 6 |
人或鼠 |
| 细胞凋亡 |
效应因子 |
Caspase 6 |
人或鼠 |
| 细胞焦亡 |
炎症 |
Caspase 1 |
人或鼠 |
| 细胞焦亡 |
炎症 |
Caspase 4 |
人 |
| 细胞焦亡 |
炎症 |
Caspase 5 |
人 |
| 细胞焦亡 |
炎症 |
Caspase 11 |
鼠 |
| 细胞焦亡 |
炎症 |
Caspase 12 |
部分人或鼠 |
| 细胞焦亡 |
炎症 |
Caspase 13 |
牛 |
表2：半胱天冬酶活性的肽识别序列 对于半胱天冬酶底物和抑制剂
| 肽识别序列 |
氨基酸序列 |
目标Caspase |
| IETD |
Ile-Glu-Thr-Asp |
Caspase 8, Granzyme B |
| DEVD |
Asp-Glu-Val-Asp |
Caspase 3, 6, 7, 8, or 10 |
| LEHD |
Leu-Glu-His-Asp |
Caspase 9 |
| VAD |
Val-Ala-Asp |
Caspase 1, 2, 3, 6, 8, 9 or 10 |
表3：显色半胱天冬酶底物
| 底物 |
目标Caspase |
吸收 (nm) |
颜色 |
规格 |
货号 |
| Ac-DEVD-pNA *CAS 189950-66-1* |
Caspase 3 |
405 nm |
黄色 |
5 mg |
13405 |
| Z-DEVD-pNA |
Caspase 3 |
405 nm |
黄色 |
5 mg |
13422 |
| Z-IETD-pNA *CAS 219138-21-3* |
Caspase 8, Granzyme B |
405 nm |
黄色 |
5 mg |
13413 |
表4：荧光半胱天冬酶底物
| 底物 |
目标Caspase |
Ex (nm) |
Em (nm) |
ε¹ |
Φ² |
规格 |
货号 |
| Ac-DEVD-AFC *CAS 201608-14-2* |
Caspase 3, 7 |
376 |
482 |
17000 |
0.53 |
5 mg |
13401 |
| Ac-DEVD-AMC *CAS 169332-61-0* |
Caspase 3, 7 |
341 |
441 |
19000 |
N/D |
5 mg |
13402 |
| Z-DEVD-AFC |
Caspase 3, 7 |
376 |
482 |
17000 |
0.53 |
5 mg |
13420 |
| Z-DEVD-AMC *CAS 1135416-11-3* |
Caspase 3, 7 |
341 |
441 |
19000 |
N/D |
5 mg |
13421 |
| Z-DEVD-ProRed™ 620 |
Caspase 3, 7 |
532 |
619 |
N/D |
N/D |
1 mg |
13433 |
| (Z-DEVD)2-R110 *CAS 223538-61-2* |
Caspase 3, 7 |
500 |
522 |
80000 |
N/D |
1 mg |
13430 |
| Z-DEVD-ProRed™ 620 |
Caspase 3, 7 |
532 |
619 |
N/D |
N/D |
1 mg |
13433 |
| Ac-IETD-AFC *CAS 211990-57-7* |
Caspase 8, Granzyme B |
376 |
482 |
17000 |
0.53 |
5 mg |
13410 |
| Ac-IETD-AMC |
Caspase 8, Granzyme B |
341 |
441 |
19000 |
N/D |
5 mg |
13411 |
| Z-IETD-AFC *CAS 219138-02-0* |
Caspase 8, Granzyme B |
376 |
482 |
17000 |
0.53 |
5 mg |
13425 |
| (Ac-IETD)2-R110 |
Caspase 8, Granzyme B |
500 |
522 |
80000 |
N/D |
1 mg |
13431 |
| Z-IETD-ProRed™ 620 |
Caspase 8, Granzyme B |
532 |
619 |
N/D |
N/D |
1 mg |
13434 |
| Ac-LEHD-AMC *CAS 292633-16-0* |
Caspase 9 |
341 |
441 |
19000 |
N/D |
5 mg |
13426 |
| (Ac-LEHD)2-R110 |
Caspase 9 |
500 |
522 |
80000 |
N/D |
1 mg |
13427 |
| Z-LEHD_ProRed™ 620 |
Caspase 9 |
532 |
619 |
N/D |
N/D |
1 mg |
13435 |
表5：可逆和不可逆半胱天冬酶抑制剂
| 抑制剂 |
目标Caspase |
结合 |
Ex (nm) |
Em (nm) |
规格 |
货号 |
| Ac-DEVD-CHO *CAS 169332-60-9* |
Caspase 3, 7 |
可逆的 |
- |
- |
1 mg |
13403 |
| Ac-IETD-CHO *CAS 191338-86-0* |
Caspase 8 |
可逆的 |
- |
- |
5 mg |
13412 |
| mFluor 450-VAD-FMK |
Caspase 1, 2, 3, 6, 8, 9, 10 |
不可逆 |
406 |
445 |
25 tests |
13475 |
| mFluor™ 510-VAD-FMK |
Caspase 1, 2, 3, 6, 8, 9, 10 |
不可逆 |
412 |
505 |
25 tests |
13476 |
| FITC-C6-DEVD-FMK |
Caspase 3, 7 |
不可逆 |
491 |
516 |
1 mg |
13406 |
| FITC-C6-DEVD-FMK |
Caspase 3, 7 |
不可逆 |
491 |
516 |
100 µg |
13408 |
| FITC-C6-LEHD-FMK |
Caspase 9 |
不可逆 |
491 |
516 |
1 mg |
13407 |
| FITC-C6-LEHD-FMK |
Caspase 9 |
不可逆 |
491 |
516 |
100 µg |
13409 |
| FAM-VAD-FMK |
Caspase 1, 2, 3, 6, 8, 9, 10 |
不可逆 |
493 |
517 |
25 tests |
13470 |
| SRB-VAD-FMK [Sulforhodamine B-VAD-FMK] |
Caspase 1, 2, 3, 6, 8, 9, 10 |
不可逆 |
559 |
577 |
25 tests |
13472 |
| TF4-VAD-FMK |
Caspase 1, 2, 3, 6, 8, 9, 10 |
不可逆 |
578 |
602 |
25 tests |
13471 |
Caspase 3、7、8 和 9 活性检测
Cell Meter Caspase 活性检测试剂盒为检测细胞中的 Caspase 活性提供了一种强大而方便的方法。这些试剂使用含有识别位点的底物，这些识别位点专用于检测 caspase 3 和 7、caspase 8 或 caspase 9 的，以及设计用于同时检测所有四种 caspase 的多重检测。半胱天冬酶识别序列的结合抑制了荧光团或发光团产生可量化信号的能力。在适当的半胱天冬酶存在的情况下，荧光团或发光团从识别序列上切割下来并自由产生表示细胞凋亡的荧光或发光信号。
图2.Jurkat 细胞中 Caspase 活性的检测。 Jurkat 细胞在同以 200,000 个细胞/孔接种在 Costar 黑色/透明 96 孔板中。 细胞用终浓度为 1 mM 的星形孢菌素处理 4 小时（红色条），而未处理的细胞用作对照（蓝色条）。 添加单 caspase 检测溶液（100 µL/孔）（caspase 3/7 #1、caspase 8 #2 或 caspase 9 #3）或三重 caspase 检测溶液（caspase #4 加入 3/7、8 和 9）并在室温下孵育 1 小时。 使用 FlexStation 荧光酶标仪在指定波长检测荧光强度。 caspase 3/7、8 和 9 的活性可以在单次测定中检测到，而不受其他 caspase 的干扰。
表6：用于检测 Caspase 3、7、8 和 9 活性的试剂盒
| 试剂盒 |
平台 |
Ex (nm) |
Em (nm) |
规格 |
货号 |
| Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 蓝色荧光 |
微孔板/HCS |
360 |
570 |
200 tests |
22795 |
| Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光 |
微孔板/HCS |
490 |
525 |
200 tests |
22796 |
| Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光 |
微孔板/HCS |
540 |
620 |
200 tests |
22797 |
| Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光 适合于流式细胞检测 |
流式细胞仪 |
488 |
530 |
100 tests |
22823 |
| Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒 蓝色荧光 |
微孔板/HCS |
370 |
450 |
200 tests |
22812 |
| Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光 |
微孔板/HCS |
490 |
525 |
200 tests |
22798 |
| Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光 |
微孔板/HCS |
540 |
620 |
100 tests |
22816 |
| Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒 蓝色荧光 |
微孔板/HCS |
375 |
435 |
200 tests |
22813 |
| Cell Meter Caspase 3/7/8/9活性细胞凋亡复用检测试剂盒 三色荧光 |
微孔板/HCS |
三重荧光 |
三重荧光 |
100 tests |
22820 |
表7：caspase 3/7 活性溶液的检测
| 产品名称 |
样品类型 |
平台 |
Ex (nm) |
Em (nm) |
规格 |
货号 |
| Amplite 比色法Caspase 3/7活性检测试剂盒 黄色荧光 |
Cell Extracts |
光吸收酶标仪 |
490 |
/ |
200 tests |
13507 |
| Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 蓝色荧光 |
Cell Extracts |
荧光酶标仪 |
350 |
450 |
500 tests |
13502 |
| Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 绿色荧光 |
Cell Extracts |
荧光酶标仪 |
490 |
525 |
500 tests |
13503 |
| Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 红色荧光 |
Cell Extracts |
荧光酶标仪 |
535 |
620 |
100 tests |
13504 |
活细胞 Caspase 结合分析
在细胞凋亡中，关键事件之一是半胱天冬酶的，这对于细胞凋亡的启动很重要。 Cell Meter 活细胞 Caspase 结合试剂盒使用荧光细胞渗透性和探针来检测 Caspase 1、2、3/7、6、8、9、10 和 13 的活性。一旦与半胱天冬酶结合，荧光试剂就会保留在细胞内。结合后会阻止半胱天冬酶进一步催化，但不会阻止细胞凋亡的进行。 Caspase 结合试剂盒适用于荧光显微镜、流式细胞仪和荧光酶标仪。
表8：caspase 结合检测试剂盒
| 产品名称 |
目标Caspase |
Ex (nm) |
Em (nm) |
滤波片 |
通道 |
规格 |
货号 |
| Cell Meter 活细胞Caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光 |
Caspase 1 |
490 |
525 |
FITC |
FL1 |
25 Tests |
20108 |
| Cell Meter 活细胞Caspase 2结合检测试剂盒 绿色荧光 |
Caspase 2 |
490 |
525 |
FITC |
FL1 |
25 Tests |
20111 |
| Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 绿色荧光 |
Caspase 3/7 |
490 |
525 |
FITC |
FL1 |
25 Tests |
20100 |
| Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 红色荧光 |
Caspase 3/7 |
550 |
595 |
TRITC |
FL1 |
25 Tests |
20101 |
| Cell Meter 活细胞Caspase 6结合检测试剂盒 绿色荧光 |
Caspase 6 |
490 |
525 |
FITC |
FL1 |
25 Tests |
20113 |
| Cell Meter 活细胞Caspase 8结合检测试剂盒 绿色荧光 |
Caspase 8 |
490 |
525 |
FITC |
FL1 |
25 Tests |
20115 |
| Cell Meter 活细胞Caspase 9结合检测试剂盒 绿色荧光 |
Caspase 9 |
490 |
525 |
FITC |
FL1 |
25 Tests |
20117 |
| Cell Meter 活细胞Caspase 10结合检测试剂盒 绿色荧光 |
Caspase 10 |
490 |
525 |
FITC |
FL1 |
25 Tests |
20119 |
| Cell Meter 活细胞Caspase 13结合检测试剂盒 绿色荧光 |
Caspase 13 |
490 |
525 |
FITC |
FL1 |
25 Tests |
20125 |
| Cell Meter 通用Caspase活性荧光法检测试剂盒 红色荧光 适合于流式细胞检测 |
Caspase-1, 3/7, 4, 5, 6, 8, 9 |
649 |
664 |
- |
APC |
25 Tests |
22822 |
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