生物素和链霉亲和素（Biotin and Streptavidin）

生物素-链霉亲和素复合物是常用的标记物之一，用于结合生物分子，如蛋白质、脂质和核酸，以及合成分子，如荧光标记。 它在样品制备领域取得了巨大成功，作为许多纯化系统的核心部分，并在显微镜和流式细胞术等仪器的许多检测系统中发挥着关键作用。

生物素-链霉亲和素偶联系统

生物素-链霉亲和素偶联系统被广泛使用主要是由于两个因素。 首先是生物素和链霉亲和素分子本身的尺寸相对较小，这允许与生物活性大分子（如抗体）结合，而不会对其功能（即抗体的结合位点）产生阻抗。 第二个是生物素和链霉亲和素相互结合的特异性，以及随后结合的强度，这使得流线型的生物测定应用成为可能。 链霉亲和素四聚体对生物素具有极高的结合亲和力，其解离常数 (Kd) 约为 10-14 mol/L。 这种紧密而特异的结合是快速的，并且能够承受极端的 pH 值、温度、有机溶剂和变性试剂。

图1. 链霉亲和素-生物素相互作用的图示

生物素-链霉亲和素系统的优势

生物素-链霉亲和素系统的一个主要优点是能够提高检测灵敏度。 这在很大程度上是由于链霉亲和素的四聚体构象。一种链霉亲和素蛋白能够以高亲和力和选择性结合四种生物素分子。 这种多样性能够放大弱信号，并通过简单的工作流程提高哺乳动物细胞或组织中中低丰度目标的检测灵敏度。

另一个关键优势是生物素-链霉亲和素系统的多功能性。 因为链霉亲和素可以与多种报告标签结合，所以它可以很容易地结合到几乎所有的免疫测定中。 例如，链霉亲和素的酶偶联物广泛用于酶联免疫吸附试验 (ELISA)，而荧光标记的链霉亲和素，如 iFluor 488 链霉亲和素，则广泛用于细胞表面标记、荧光细胞分选 (FACS) 和其他荧光检测成像应用。

应用

• 酶联免疫吸附试验 (ELISA)
• 免疫组织化学 (IHC)
• Power Styramide 信号放大，是酪胺的替代品
• 免疫印迹
• 免疫荧光显微镜
• 细胞表面标记
• 亲和纯化
• 荧光细胞分选 (FACS)
• 流式细胞术

生物素

生物素是一个小的 244 道尔顿半抗原分子。它对链霉亲和素的结合亲和力通常被用于检测生物靶标。生物素具有两个特性，使其成为生物偶联物开发的理想选择。 首先，生物素的体积相对较小。 这允许将多个生物素标签标记到单个蛋白质或抗体上，而不会阻碍它们的生物反应性。 其次，是生物素分子的戊酸侧链。 该链可以被衍生化以促进用于将生物素化学标记到蛋白质上的各种反应基团的结合，而不改变生物素对链霉亲和素的结合亲和力。

我们提供生物素化二抗、蛋白质、核苷酸和其他小分子，用于基于链霉亲和素的扩增技术。 对于生物素化探针不可用的分析，我们提供了许多生物素化试剂和试剂盒，使研究人员能够化学标记蛋白质、核酸和表面材料，以制造定制的生物素化试剂。

特色产品

1. 荧光生物素衍生物
   生物素化二抗
   生物素化核苷酸
   生物素化氨基酸
   活性生物素衍生物
   ReadiLink 蛋白质生物素化试剂盒
   Amlite 比色生物素定量试剂盒

荧光生物素衍生物

荧光生物素衍生物在同一分子中同时包含荧光团和生物素部分。 这些试剂用于通过荧光检测和定量生物素结合蛋白。与荧光生物素结合的链霉亲和素相关的强猝灭可用于检测链霉亲和素（或亲和素）的浓度。

表1. 荧光生物素衍生物相关产品

生物素化二抗

我们提供与基于链霉亲和素的扩增技术一起使用的生物素化二抗。使用生物素化二抗的一个关键优势是可以灵活地在多个应用中使用相同的二抗，只需使用不同的链霉亲和素偶联物即可。

 链霉亲和素偶联物

1. HRP-链霉亲和素（成像需要 HRP 底物）
   AP-链霉亲和素（成像需要 AP 底物）
   iFluor -链霉亲和素
   mFluor -链霉亲和素
   APC、PE 和串联染料-链霉亲和素（藻胆蛋白的明亮荧光和快速光漂白非常适合流式细胞术应用）

表2. 生物素化二抗相关产品

生物素化核苷酸

生物素修饰的三磷酸核苷类似物，如 dUTP 和 dCTP，可以通过酶促整合到 DNA 或 RNA 片段中，用于荧光原位杂交 (FISH)、DNA 阵列、微阵列和其他杂交技术。 标准酶促非放射性 DNA 标记反应，包括 3'' 末端标记、cDNA 标记、切口平移、PCR 和随机引物标记。 每个生物素化核苷酸在生物素与其在核苷酸上的连接点之间包含一个 11、14、16 或 20 个原子的间隔区。 

表3. 生物素化核苷酸相关产品

生物素化氨基酸

生物素化肽适用于需要固定在链霉亲和素或亲和素包被的微量滴定板或膜上的免疫检测研究和生物医学筛选试验。 在 Fmoc 固相合成过程中，生物素可以连接到肽的 N 端或连接到赖氨酸 (Lys)、谷氨酸 (Glu) 或天冬氨酸 (Asp) 的侧链。 在 FMOC-Glu(生物素基-PEG)-OH 和 FMOC-Asp(生物素基-PEG)-OH 中加入 PEG 间隔区可减少目标肽和链霉亲和素之间的空间位阻，从而实现更好的生物素结合。PEG 间隔区的亲水性大限度地减少了非特异性相互作用并提高了试剂和生物素化肽的溶解度。

表4. 生物素化氨基酸相关产品

活性生物素衍生物

反应性生物素衍生物含有反应性部分，例如琥珀酰亚胺酯或马来酰亚胺，它们有助于将生物素标记到蛋白质、抗体和其他大分子上。 选择活性生物素衍生物时，请考虑以下事项：

功能性基团靶向 - 特异性反应性部分靶向并结合其各自的官能团，用于蛋白质和其他大分子的靶向或非选择性生物素化（例如琥珀酰亚胺酯靶向伯胺，马来酰亚胺靶向硫醇或巯基）。
溶解度 - 这会影响目标蛋白质或大分子的生物素化。
间隔臂长度 (PEG) - 提高目标蛋白的检测灵敏度并减少空间位阻

表5. 荧光生物素衍生物相关产品

ReadiView 生物素化试剂

确定蛋白质的生物素化程度非常具有挑战性，因为生物素的内在吸收很难与蛋白质和核酸区分开来。 为促进这一检测，我们提供了一系列发色反应性肉毒素衍生物 ReadiView 生物素。 这些新型生物素化试剂包含一个专门设计的“彩色标签 (CT)”，其佳位置位于两个间隔臂之间。 这些间隔臂减少了空间位阻并提高了水溶性，而 CT 标签通过计算 280 nm/385 nm 的吸收比使生物素化程度易于量化。 CT 标签不影响生物素与链霉亲和素的复合，对荧光链霉亲和素偶联物的淬灭影响小。 ReadiView 生物素有胺反应性、硫醇反应性和点击化学形式。

图3. ReadiView 生物素琥珀酰亚胺酯（货号 3059）与专门设计的颜色标签 (CT) 结合，可轻松确定生物素化

表6. ReadiView 生物素产品

酶标链霉亲和素偶联物

酶标链霉亲和素偶联物常用于酶联免疫吸附测定 (ELISA)、免疫组织化学、免疫印迹和原位杂交技术。酶辣根过氧化物酶 (HRP) 和碱性磷酸酶 (ALP) 被广泛用作报告基因，因为它们具有高周转率、稳定性、易于结合和低成本。

为了大限度地保留酶和蛋白质的活性，我们的 HRP-链霉亲和素和 AP-链霉亲和素偶联物以 1:1（酶与链霉亲和素）的标记比制备。 可用于这些酶偶联物的显色、荧光和化学发光底物。

表7. 酶标链霉亲和素偶联物

表8. HRP 底物

表9. AP-链霉亲和素偶联物和底物

荧光链霉亲和素偶联物

荧光链霉亲和素偶联物广泛用于荧光成像，以检测生物素化抗体、配体和 DNA 探针，用于原位杂交技术、免疫组织化学和多色流式细胞术。我们提供使用 iFluor 染料、mFluor 染料、藻胆蛋白和串联染料等标记的荧光链霉亲和素的产品组合。我们的 iFluor 链霉亲和素偶联物的优点包括异常明亮的荧光、出色的光稳定性和宽摩尔范围内对 pH 不敏感的荧光。

iFluor 链霉亲和素偶联物

用 iFluor 染料标记的链霉亲和素缀合物表现出异常明亮和稳定的荧光，优于 Alexa Fluor® 和其他光谱相似的缀合物。 iFluor 链霉亲和素偶联物设计用于各种细胞分析和蛋白质分析应用，包括成像、流式细胞术和荧光蛋白质印迹。 在检测低丰度目标时避免使用蓝色荧光链霉亲和素偶联物，蓝色荧光染料具有较低的荧光，并且比其他染料具有更高的非特异性背景。

表10. 用于成像和流式细胞术的 iFluor-链霉亲和素偶联物

用于流式细胞术的 mFluor 链霉亲和素偶联物

用 mFluor 染料标记的链霉亲和素偶联物表现出小的自淬灭，产生用于流式细胞术的强荧光和光稳定性偶联物。 mFluor 链霉亲和素偶联物设计用于通过流式细胞仪中常用的主要激光线之一进行佳激发，例如 405 nm、488 nm、532 nm、561 nm 或 633 nm 激光线。

表11. 用于流式细胞术的 mFluor 链霉亲和素偶联物

用于流式细胞术的链霉亲和素 APC、PE、PerCP 和串联染料偶联物

链霉亲和素PE、APC和PerCP偶联物通常用于需要高灵敏度但不要求光稳定性的应用，主要是流式细胞术、FACS、免疫表型分析和酶标仪。 

表12. 用于流式细胞术的链霉亲和素 APC、PE、PerCP 和串联染料偶联物

链霉亲和素-Xtra 偶联物

链霉亲和素-Xtra iFluor 偶联物的佳标记程度可产生亮的荧光链霉亲和素偶联物，用于检测细胞成像、流式细胞术和蛋白质印迹应用中的生物素化抗体。与传统的链霉亲和素 Alexa Fluor® 偶联物相比，Streptavidin-Xtra iFluor 偶联物对低丰度目标进行成像，具有更高的灵敏度。

优点

明亮且稳定的荧光，没有明显的自淬灭
高信噪比，与 Alexa Fluor® 相比，信号提高了 3~5 倍
宽摩尔范围内的 pH 不敏感荧光

表13. 链霉亲和素-Xtra 偶联物