百萤问号：iFluor及其相关产品常见问题解答

答：iFluor产品的形式多种多样，它们的用途也各不相同，以下是AAT Bioquest常见的iFluor产品的几种形式及用途：

• 琥珀酰亚胺酯：经常用于标记蛋白质、抗体、肽、核酸和其他生物分子上的伯胺（-NH₃）。它们通常用于制备生物缀合物。适用范围：免疫化学、荧光原位杂交（FISH）、细胞示踪、受体标记和荧光类似物细胞化学。
• 马来酰亚胺：用于标记硫醇或巯基（-SH）以选择性修饰指定位置的蛋白质。硫醇反应性染料通常用于制备荧光肽、蛋白质和寡核苷酸，以探测生物学结构、功能和相互作用。
• 叠氮化物：用于通过铜（I）催化的叠氮化合物（CUAAC）或无铜（I）菌株促进的叠氮化合物点击化学（SPAAC）反应来标记亚乙基。
• 炔烃：通过Cu（I）催化的叠氮化合物（CUAAC）或无Cu（I）菌株促进的叠氮化合物点击化学（SPAAC）反应标记叠氮化合物基团。
• 羧酸：用于碳二亚胺预活化后的胺标记或用于醇的Steglich酯化反应
• 胺：用于标记各种亲电子化合物，例如活化的酯。

答：为了使用荧光鬼笔环肽缀合物对F-肌动蛋白染色，您必须首先将石蜡包埋的组织切片去石蜡。去除组织切片的石蜡方法如下：

1. 将切片加热到57°C持续5分钟。
2. 将切片浸入2次二甲苯中，每次5分钟。
3. 将切片分别浸入100％，95％和70％的乙醇中，每次5分钟。
4. 用1X PBS洗涤2次，每次5分钟。
5. 进行F-肌动蛋白标记。

答：可以用戊二醛固定细胞。

使用甲醛、多聚甲醛或戊二醛固定细胞会产生良好的肌动蛋白丝染色效果良好。

图1.鬼笔环肽-iFluor 488缀合物染色的HeLa细胞的荧光图像。 将细胞固定在4％甲醛中，使用MitoLite Red FX600（Cat＃22677，红色）染色线粒体，使用Nuclear Blue DCS1（Cat＃17548，蓝色）染色细胞核。后使用带有FITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

答：Styramide（PSA）细胞信号放大类产品与Tyramide(TSA)信号放大类产品的原理相似，是Tyramide的升级版。

PSA产品的优势：

1.检测灵敏度比标准IHC，ICC，IF方法高出100倍

2.改进的荧光信号比酪胺（TSA）试剂高10至50倍

3.PSA 自由基的更高反应性允许在HRP-靶相互作用位点更快速，有效和更稳定记Styramide缀合物。

4.在不牺牲灵敏度的情况下，PSA可以使用更少量的抗体/探针

图2.分别用iFluor 488 PSA和Alexa Fluor 488 TSA染色甲醛固定的石蜡包埋人肺腺癌阳性组织的染色结果图。人肺腺癌阳性组织切片用兔抗EpCam抗体染色，然后用polyHRP标记的山羊抗兔IgG二抗孵育，后使用iFluor 488 PSA （Cat#45020）和Alexa Fluor 488 TSA分别染色。图像显示iFluor 488 PSA与Alexa Fluor 488 TSA相比提高了荧光IHC的灵敏度。