百萤课堂：可用于多种生物学应用的花青染料
今天百萤给大家带了的是花青素及其衍生物的介绍和推荐。与其他经典荧光染料相比，花青染料的荧光信号如何？可用于哪些领域？光谱性质是怎样的？效果良好的花青类产品都有哪些？能修饰哪些反应基团？感兴趣的朋友一起来看看吧！
荧光素及其衍生物
“花青”这个名词是来自于聚次甲基组合成染料家族中的，它是一个非系统名称，cyanin一词源自英语单词“ cyan”，通常表示蓝绿色。 花青染料的摩尔消光系数（约150,000至300,000 M-1cm-1）非常大，结合适度的量子产率，使它可以产生极其明亮的荧光信号。 事实证明，花青在许多领域都非常有用，包括成像技术，生物学，激光技术和分析化学等。 AAT Bioquest提供了多的花青染料集合，它们可用作多种生物学应用的分子探针。 对于某些生物学应用，花青可以有利地替代其他常规染料，例如荧光素和罗丹明。
花青染料Cy3和Cy5
图1.Cy3（左），Cy5（中）和Cy7（右）染料的大吸光度（虚线）和发射光（阴影区域）。
在花青染料中，受欢迎的是发出黄绿色荧光（约550 nm激发，约570 nm发射）的Cy3和在红色区域发出荧光（约650 nm激发，约670 nm发射）的Cy5。 由于它们的光谱重叠极小，通常将Cy3和Cy5结合起来进行检测。Cy3可以通过各种荧光仪，成像仪和带有TRITC标准滤波片的显微镜进行检测。 由于其较高的摩尔消光系数，Cy3染料也很容易在电泳凝胶和溶液中用肉眼观察。 Cy5的消光系数也非常高（在凝胶电泳中肉眼可检测到1 nmol），并且在红色区域具有大的荧光发射峰，因此Cy5成为了红色荧光染料的流行替代品。
光谱性质
| 产品名称 | 激发光线 | Ex / Em（nm） | 滤波片组 | 消光系数（ε） | 量子产率（Φ） |
| Cy3 | 532nm | 554/568nm | Cy3 / TRITC | 150,000 | 0.15 |
| Cy5 | 633-647nm | 650/669nm | Cy5 | 250,000 | 0.27 |
| Cy7 | 730nm | 754/778nm | Cy7 | 250,000 | 0.3 |
磺化与非磺化花青
磺化和非磺化花青染料具有非常相似的荧光特性，在许多应用中它们可以互换使用。染料之间的差别主要在于它们的溶解度。在标记生物分子之前，非磺化花青必须溶解在有机溶剂中，如DMF或DMSO。而磺化花青可用于水性条件（带电荷的磺酸盐基团可减少染料和共轭物的聚集）。为了通过对水或水缓冲液的透析纯化，必须使用磺化花青有效去除未反应的染料。通过凝胶过滤、色谱或电泳纯化对磺化和非磺化菁都是合适的。
表2.磺化和非磺化Cy3，Cy5和Cy7染料的光谱比较。
| Cy3 | Cy5 | Cy7 | ||||
| 形式 | 磺化 | 非磺化 | 磺化 | 非磺化 | 磺化 | 非磺化 |
| Ex / Em（nm） | 554/568 | 650/669 | 754/778 | |||
| 过滤片组 | Cy/ TRITC | Cy5 | Cy7 | |||
| ε(消光系数 cm-1M-1) | 150,000 | 140,000 | 250,000 | 230,000 | 250,000 | 250,000 |
| Φ(荧光量子产率) | 0.10 | 0.07 | 0.27 | 0.16 | 0.12 | 0.2 |
| 货号 | 263 | 191 | 268 | 195 | 161 | 198 |
花青产品类型
我们提供多种花青产品选择，包括用于标记生物分子，缀合物，指示剂等的活性染料和结合试剂盒。
花青反应性染料
用于修饰以下反应基团的Cy染料标记的化学试剂：
| 胺 | 巯基 | 羰基 | 点击化学 |
花青染料标记的荧光二抗缀合物
从多种花青标记的荧光二抗和链霉亲和素偶联物中选择，用于一抗的信号放大检测：
| 山羊抗小鼠IgG | 山羊抗兔IgG | 链霉亲和素 |
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