AF 594胺 等同于 Alexa Fluor 594
| Ex (nm) | 590 | Em (nm) | 618 |
| 分子量 | 908.14 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
Alpha Fluor 594胺与AlexaFluor®594C5胺的分子相同。荧光染料胺是可用于向含有羰基的生物分子添加荧光标记的反应性分子。Alpha Fluor 594胺与羧酸，醛和酮反应。它是开发Alpha Fluor 594探针的非常有用的构建模块。
操作方案
标记寡核苷酸
1.准备以下试剂：
200mMTHPTA [tris（3-羟丙基三唑基甲基）胺]水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烃修饰的低聚水溶液（尽可能浓缩，例如> 10 mg / mL）
100 mM抗坏血酸钠水溶液
10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）
2.在反应前将CuSO4与THPTA以1：2的比例混合并充分涡旋几分钟。该溶液在冷冻时可稳定数周。
3.向炔烃改性的低聚物溶液中加入过量的染料叠氮化物（摩尔比为2-5当量）。
4.加入5当量的THPTA / CuSO4工作溶液（来自步骤1）。
5.加入10-30当量的抗坏血酸钠。
6.在室温下搅拌，涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。
7.乙醇通过所需方法（例如HPLC）沉淀或纯化寡聚物。
标记肽
1.准备以下试剂：
200 mM THPTA配体水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烃修饰肽水溶液或DMF溶液（取决于您的肽溶解度，如果可能，> 10 mg / mL）
100 mM抗坏血酸钠水溶液
10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）
2.在反应前几分钟以1：2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。 该溶液在冷冻时可稳定数周。
3.向炔烃修饰的肽溶液中加入过量的染料叠氮化物（摩尔比为5-10当量）。
4.加入5-10当量的THPTA / CuSO4。
5.加入10-20当量的抗坏血酸钠。
6.在室温下搅拌，涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。
7.通过HPLC纯化您想要的肽。
标记炔烃有机小分子
1.准备以下试剂：
200 mM THPTA配体水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烃化合物水溶液或DMF溶液（取决于您的化合物溶解度，如果可能，> 10mg / mL，）
100 mM抗坏血酸钠水溶液
10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）。
2.在反应前几分钟以1：2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。当冷冻时，该溶液可稳定数周。
3.向炔烃溶液中加入过量的染料叠氮化物（摩尔比为5-10当量）。
4.加入25当量的THPTA / CuSO4。
5.加入50当量的抗坏血酸钠。
6.在室温下搅拌反应混合物30-60分钟。
7.通过色谱或其他方法纯化您想要的分子。
标记生物聚合物
1.准备以下试剂：
200 mM THPTA配体水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烃改性的水中生物聚合物（尽可能浓缩，例如> 5毫克/毫升）
100 mM抗坏血酸钠水溶液
10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）。
2.在反应前几分钟以1：2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。 该溶液在冷冻时可稳定数周。
3.向炔烃改性的生物聚合物溶液中加入过量的染料叠氮化物（负载比：5-20染料叠氮化物/炔烃）。
4.加入5摩尔当量（参考染料叠氮化物）的THPTA / CuSO 4。
5.加入10当量的抗坏血酸钠（参见染料叠氮化物）。
6.在室温下搅拌，涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。
7.通过凝胶过滤或透析纯化您想要的分子。
标记细胞，细胞裂解物或生物样品
1.准备以下试剂：
水性缓冲液或100mM THPTA配体水溶液
20mM CuSO4水溶液
300mM抗坏血酸钠水溶液
2.5mM炔烃或叠氮化物标记试剂水溶液或DMSO溶液
2.对于每个叠氮化物或炔烃修饰的细胞或细胞裂解物样品，将以下试剂加入1.5 mL微量离心管中，然后短暂涡旋混合。
50μL细胞或细胞裂解液样品
50μLPBS缓冲液
50μL5mM相应的染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（或染料炔烃）检测试剂
3.加入10μL100mM THPTA溶液，短暂涡旋混合。
4.加入10μL20mM CuSO4溶液，短暂涡旋振荡。
5.加入10μL300mM抗坏血酸钠溶液以引发点击反应，短暂涡旋混合。
6.保护点击反应不受光照，使其在室温下孵育30分钟。
7.点击标记细胞或细胞裂解物并准备用于下游处理和/或分析。
参考文献
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Green tea catechins quench the fluorescence of bacteria-conjugated Alexa fluor dyes
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| 产品名称 | 货号 |
| AF 488胺 等同于Alexa Fluor 488 | Cat#1705 |
