AF546 酪胺（XFD546 tyramide reagent）
| Ex (nm) | 561 | Em (nm) | 572 |
| 分子量 | 1282.88 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
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产品货期： 咨询 |
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适用范围： 该产品适合标记抗体或蛋白。应用于细胞或组织。 |
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产品优势： 1.荧光信号更强； 2.灵敏度更高； |
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产品简介： AF546酪胺（XFD546 tyramide reagent ），是一种用于荧光信号放大的产品，它通过HRP和过氧化氢催化，标记到抗体上。 |
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注意事项： 1. 该产品不能进行活体成像。 2. 100slides：一管试剂足够100个玻片使用。 3. 200slides大约为100ug。 |
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| 查看光谱 | |
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适用仪器： |
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| 荧光显微镜 | |
| Ex: | Cy3/TRITC滤波片组 |
| Em： | Cy3/TRITC滤波片组 |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 滤波片： | Cy3/TRITC滤波片组 |
样品实验方案
简要概述
- 修复/透化/阻断细胞或组织
- 在封闭缓冲液中添加一抗
- 添加HRP标记的二抗
- 准备酪酰胺工作溶液，并在室温下在细胞或组织中涂抹5-10分钟
溶液配制
储备溶液配置
在没有额外说明的情况下，所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融。
酪胺储备液（200X）
将100μLDMSO加入XFD546酪胺小瓶中，并充分混合。
注意：未使用的Tyramide原液可以在2-8℃下避光保存，避免反复冻融。
工作溶液配置
酪胺工作溶液（1X）
将100μL酪胺储备液加入20 mL含有0.003％H2O2的缓冲液中。
注意：1. Tris Buffer，pH = 7.4更合适。
2. Tyramide工作溶液即用即配。
3. 20 mL溶液可以进行200次测试。
实验方案
（该方案适用于细胞或组织染色）
细胞固定和透化
1.在室温下，用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。
2.用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.在室温下，用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。
4.用PBS冲洗细胞或组织两次。
组织固定，脱石蜡和补液
（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）
过氧化物酶标记
1.可选：将细胞或组织样本置于过氧化物酶淬灭液（如3%过氧化氢）中孵育10分钟，以淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下，用PBS冲洗两次。
2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。
3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。
4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。
5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。
6.向每个样品中加入100μL二抗-HRP工作溶液，在室温下孵育60分钟。
注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。
7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。
酪胺标记
1.向每个样品中添加100 µL 酪胺工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。
注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短酪胺的孵育时间。您应使用不同孵育时间点的阳性和阴性对照样本，以优化孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪胺。
2.用PBS冲洗3次。
复染和荧光成像
1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。
2.加上盖玻片。
3.使用适当的滤波器观察酪胺的荧光信号。
表1.建议用于核复染色的产品。
| 货号 | 产品名称 | Ex/Em(nm) |
| 17548 | 核蓝 DCS1 | 350/461 |
| 17550 | 核绿 DCS1 | 503/526 |
| 17551 | 核橙 DCS1 | 528/576 |
| 17552 | 核红 DCS1 | 642/660 |
