SunRed 醋酸 细胞活性检测

SunRed 醋酸 细胞活性检测是美国AAT Bioquest生产的用于细胞活性检测的试剂盒，酯酶可催化水解SunRed 乙酸盐(SRA)产生Sun Red荧光基团，该荧光基团在633nm处可以被激发，发射光波长在~660nm处。Sun Red荧光基团可以用Cy5滤光片检测，大多数商业荧光仪器中都装有Cy5滤光片。尽管Sun Red在633nm处被激发，~660nm发出红光；但是SRA在633nm处的光吸收很小，在没有红光发射的条件下，这使SRA成为灵敏的NIR（近红外）酯酶底物之一。在流行的荧光色彩应用于其它细胞功能分析时，SRA提供另一种颜色用于可行性细胞的分析。SRA是一个非荧光性的疏水性化合物，它可以通过细胞膜，在细胞内酯酶水解乙酸盐基团作用下，产生高强度荧光的产物Sun Red。Sun Red分子在完整细胞膜结构的细胞内积累至产生足够深的红色荧光，因此可以用作细胞的标签。细胞膜结构不完整或者代谢活性弱的细胞，不能够积累荧光产物，因此不显现深色的红色荧光。SRA可以与绿色荧光染料试剂（例如FITC或者Alexa Fluor 488标记的抗体）结合使用。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的SunRed 醋酸 细胞活性检测。

点击查看光谱

 

适用仪器

---

荧光显微镜
Ex:	620nm
Em:	660nm
推荐孔板:	黑色透明底板
滤波片:	Cy5滤波片组
荧光酶标仪
Ex:	620nm
Em:	660nm
Cutoff:	640nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物制备细胞
2.去除培养基
3.添加SunRed 醋酸酯工作溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）
4.在37°C，5％CO2培养箱中孵育1小时
5.用HHBS清洗并更换工作溶液
6.读取Ex / Em = 620/660 nm处的荧光强度（截止640 nm）

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 SunRed 醋酸盐原液（2至10 mM）
准备2至10 mM的SunRed 醋酸盐在DMSO中的储备溶液。 应立即使用原液。

  

2.工作溶液

SunRed 醋酸盐工作溶液：
在实验前，在含有20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液的1X Hank盐溶液中，以5至10μM制备SunRed 醋酸盐工作溶液。

点击查看样品制备方案

 

样品分析

1.从细胞中取出培养基。

2.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的SunRed 乙酸盐工作溶液。

3.将SunRed 醋酸盐工作溶液板在室温或37°C下孵育1小时，避光。 适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。 对于非粘附细胞，建议在孵育后以800rpm离心细胞板2分钟。

4.监测Ex / Em = 620 / 660nm处的荧光强度（截止640nm）。

 

参考文献

Neuropathy target esterase is required for adult vertebrate axon maintenance
Authors: Read DJ, Li Y, Chao MV, Cavanagh JB, Glynn P.
Journal: J Neurosci (2009): 11594

The secreted esterase of group a streptococcus is important for invasive skin infection and dissemination in mice
Authors: Zhu H, Liu M, Sumby P, Lei B.
Journal: Infect Immun (2009): 5225

Application of glutaraldehyde for the staining of esterase-active cells with carboxyfluorescein diacetate
Authors: Morono Y, Takano S, Miyanaga K, Tanji Y, Unno H, Hori K.
Journal: Biotechnol Lett (2004): 379

Evaluation of fitness components in strains of Drosophila mulleri carrying different genotypes for an esterase
Authors: Lourenco MF, Ceron CR, Carareto CM.
Journal: Cytobios (2001): 125

Comparison of two in vitro activation systems for protoxicant organophosphorous esterase inhibitors
Authors: Barber D, Correll L, Ehrich M.
Journal: Toxicol Sci (1999): 16

Determination of growth and lysis kinetics in plant cell suspension cultures from the measurement of esterase release
Authors: Steward N, Martin R, Engasser JM, Goergen JL.
Journal: Biotechnol Bioeng (1999): 114

Purification and properties of an esterase from the yeast Saccharomyces cerevisiae and identification of the encoding gene
Authors: Degrassi G, Uotila L, Klima R, Venturi V.
Journal: Appl Environ Microbiol (1999): 3470

Organophosphorus neuropathy target esterase inhibitors selectively block outgrowth of neurite-like and cell processes in cultured cells
Authors: Li W, Casida JE.
Journal: Toxicol Lett (1998): 139

Causes and consequences of esterase 6 enzyme activity variation in pre-adult Drosophila melanogaster
Authors: Oakeshott JG, Saad M, Game AY, Healy MJ.
Journal: Heredity (1994): 160

[Esterase-6 gene-enzyme system and resistance of Drosophila to increased temperature]
Authors: Totskii VN, Eserkepova EV, Dzhan ZU.
Journal: Genetika (1994): 342