Spexyte 细胞内pH校准缓冲液试剂盒

细胞内pH（pHi）在许多细胞事件中起着重要的调节作用，包括细胞体积调节，细胞代谢，钙调节，受体介导的信号转导，离子转运，内吞作用和其他细胞过程。胞浆中的细胞内pH通常为6.8〜7.4，酸性细胞器中的pH为4.5〜6.0。细胞内pH变化具有显着的生理学作用，例如，细胞内信使例如Ca 2+和cAMP的pH依赖性浓度影响细胞信号传导。最近的几篇报道表明，pH失调正在成为癌细胞的标志。 Spexyte 细胞内pH校准缓冲液试剂盒提供了一系列带有尼日尔霉素的pH校准缓冲液（pH 4.5〜8.0），在100–150 mM K +的存在下，它们可通过外部pH调节细胞内pH。当与pH指示剂（例如BCFL，AM或BCECF，AM）结合使用时，Spexyte 细胞内pH校准缓冲液试剂盒可创建用于确定细胞内pH的标准曲线。

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荧光酶标仪
Ex:	440, 500 nm
Em：	530 nm
Cutoff：	515 nm
推荐孔板:	黑色透明底板

样品实验方案

简要概述

1.带有pH指示剂的染色细胞（例如：BCFL，AM）
2.用HH缓冲液洗涤细胞
3.准备细胞内pH校准缓冲液
4.向细胞添加细胞内pH校准缓冲液
5.在37°C孵育10分钟
6.使用适当的Ex / Em过滤器分析细胞

 

溶液配制

1.储备溶液的制备

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. Nigericin储备溶液（10 mM）：
将276 µL DMSO（组分J）添加到小瓶尼日尔霉素（组分I）中，制成10 mM Nigericin储备溶液。

 

2.工作溶液的制备

将1 µL 10mM Nigericin储备溶液添加到1 mL标准pH缓冲液（组分A至组分H）中，制成细胞内pH校准缓冲液。

点击查看样品制备方案

 

样品示例及操作

这是使用BCFL，AM pH指示剂校准细胞内pH的样品实验方案。

1.用BCFL，AM染色细胞：

1.1在DMSO溶液中制备5 mM BCFL，AM（Cat＃21190）。
1.2在HH缓冲液+ 0.02％PF127（Cat＃20053）中稀释至5 µM。
1.3从细胞中去除生长培养基。
1.4加入100 µL BCFL，AM染色液。
1.5在37°C下孵育30分钟。
1.6去除BCFL，AM染色溶液，并用HH Buffer洗涤一次。
1.7清空每个孔。

2.制作细胞内pH标准曲线：

2.1向细胞中添加100 µL细胞内pH校准缓冲液。
2.2在37°C下孵育5-10分钟。
2.3使用适当的Ex / Em过滤器分析细胞。 例如：BCFL，AM：Ex = 440、500nm，Em = 530nm。

 

参考文献

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