Screen Quest 免洗Fluo-4钙检测试剂盒
| Ex (nm) | 495 | Em (nm) | 528 |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
钙通量分析是筛选G蛋白偶联受体（GPCR）药物发现的方法。该比值钙测定试剂盒允许均匀测量由G蛋白偶联受体或钙通道引起的细胞内钙变化。表达通过钙传递信号的GPCR的细胞被Fluo-4 AM预加载，Fluo-4 AM可以穿过细胞膜。一旦进入细胞内，Fluo-4 AM的亲脂性封闭基团就会被非特异性细胞酯酶裂解，从而导致带负电荷的Fluo-4染料留在细胞内，并且与钙结合后其荧光会大大增强。当细胞被筛选化合物刺激时，受体信号释放细胞内钙，这大大增加了Fluo-4的荧光。此Screen Quest Fluo-4 免洗钙含量测定试剂盒提供了一种优化的测定方法，用于监测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道。该测定可以使用96孔或384孔微孔板进行，并易于适应自动化。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 免洗Fluo-4钙检测试剂盒 。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 490 nm |
| Em： | 520 nm |
| Cutoff： | 510 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式: | 底部读取/分液处理 |
| 其他可用仪器 | |
| ArrayScan、FDSS、FLIPR、FlexStation、IN Cell Analyzer、NOVOStar、ViewLux |
样品实验方案
简要概述
- 在生长培养基中准备细胞
- 添加Fluo-4 AM染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
- 在37°C孵育1小时
- 检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度
溶液配制
储备溶液配制
1. Fluo-4 AM储备溶液：将200 µL DMSO加到Fluo-4 AM（组分A）的小瓶中，并充分混合。 注意：20 µL Fluo-4 NW储备液足以装满一块板。 如果将试管紧密密封，可以将未使用的Fluo-4 AM储备溶液等分，并在<-20℃下保存1个月以上。 避光并避免重复的冻融循环。
2.分析缓冲液（1X）：将1 mL的10XPluronic®F127 Plus（10 mL，组分B）加入9 mL的HHBS缓冲液（组分C）中，制成1X的测定缓冲液，并充分混合。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的10XPluronic®F127 Plus（组分B）。 避光并避免重复的冻融循环。
工作溶液配制
Fluo-4 AM上染溶液：将20 µL Fluo-4 NW储备溶液添加到10 mL的1X分析缓冲液中并充分混合。 该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。
实验步骤
1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Fluo-4 AM染料加载溶液添加到细胞板中。
2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育1小时，然后在室温下再孵育15至30分钟。 注意：如果测定需要37°C，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。
3.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。
4.通过检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度运行钙通量测定法。
图示
 图1.使用Screen Quest Fluo-4 免洗钙含量测定试剂盒在CHO-K1细胞中测量了ATP剂量反应。 将CHO-K1细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 使用Screen Quest Fluo-4 免洗钙含量测定试剂盒，将细胞与100 µL染料加载溶液一起在室温下孵育1小时。 通过Flexstation 3（MDC）添加ATP（50µL /孔），以达到指示的浓度。 |
参考文献
Lysophosphatidylcholine and its phosphorothioate analogues potentiate insulin secretion via GPR40 (FFAR1), GPR55 and GPR119 receptors in a different manner
Authors: Drzazga, Anna and Kristinsson, Hjalti and Salaga, Maciej and Zatorski, Hubert and Koziolkiewicz, Maria and Gendaszewska-Darmach, Edyta and Bergsten, Peter
Journal: Molecular and Cellular Endocrinology (2017)
