ReadiUse 三氯乙酸（TCA)法去除样本蛋白试剂盒

氨基酸，离子，代谢物和其他小分子的分析经常受生物流体，细胞和组织裂解物中存在的脂质，蛋白质和酶的干扰而阻碍。 因此，在生物样品分析之前，脱蛋白是许多程序中的必要步骤。 AAT Bioquest的脱蛋白样品制备试剂盒提供了一种快速去除生物样品中蛋白质的方法。 通过应用三氯乙酸（TCA）沉淀蛋白质。 除去沉淀的蛋白质后，用中和溶液中和样品的pH。 基于TCA的脱蛋白已成功且广泛用于样品制备之前，对小分子（例如糖原，ATP，cAMP，谷胱甘肽和抗氧化剂）进行定量。 该试剂盒中提供的TCA方法也可用于大规模去除蛋白质。 使用该试剂盒制备的生物样品可直接用于各种生化分析。

样品实验方案

1.蛋白质沉淀：

1.1均质和离心后，制备蛋白浓度小于50 mg / mL的澄清溶液样品。 将蛋白质样品放在冰上。 注意：高蛋白浓度的样品可能需要稀释。

1.2向100 µL蛋白质样品中加入10 µL冷的TCA（组分A）并短暂涡旋混合均匀。

1.3将样品在冰上放置10分钟。 以12,000 rpm离心5分钟。 将上清液（去蛋白样品）转移到另一个试管中。 注意：建议中和TCA中的样品，并立即用于相关测定。 但是，TCA中的脱蛋白样品可以在-70°C下保存长达一个月。

2.TCA中和：

2.1要中和过量的三氯乙酸，可在收集的上清液中加入10 µL冷中和溶液（组分B），并短暂涡旋混合均匀。

2.2将样品在冰上放置5分钟。 现在将样品脱蛋白并中和。

2.3（可选）读取280 nm（OD）处的吸光度以检查样品是否脱蛋白。

样品示例

      添加TCA和中和溶液（总体积约120 µL）可稀释原始样品（初始样品体积为100 µL）中的蛋白质浓度。 稀释系数可以通过以下公式计算：

      原始蛋白质浓度％=（初始样品体积）/（初始样品体积+ TCA体积+中和溶液体积）

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