Readiuse 快速发光法ATP检测试剂盒
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
Readiuse 快速发光法ATP检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测ATP的试剂盒，三磷酸腺苷（ATP）在细胞能量学，代谢调节和细胞信号传导中起着重要作用。 ATP的定量可用于各种生物应用。由于ATP是几乎所有活生物体的能源，在缺乏有生物体的情况下它们迅速降解，因此其存在可用于识别活生物体的存在。 ATP的测量已用于细胞毒性，表面细菌的检测，水中细菌的定量，培养中的体细胞和食品质量。使用萤火虫生物发光来测量ATP是由McElroy提出的，他发现ATP对于轻量生产至关重要。萤火虫萤光素酶是单体61kD酶，其催化荧光素的两步氧化，其在560nm处产生光。涉及通过ATP活化蛋白质以产生反应性混合酸酐中间体。在第二步中，活性中间体与氧反应产生一过性二氧杂环丁烷，其迅速分解为氧化产物oxyluciferin和二氧化碳以并放出光。当ATP是限制性成分时，光的强度与ATP的浓度成比例。因此，光强度的测量可以用于使用发光计来量化ATP。 AAT Bioquest的ReadiUse 快速发光测定ATP分析试剂盒（不含DTT）带有即用型所有必需组分。它为监测哺乳动物细胞中的细胞增殖和细胞毒性提供了一种快速，简单和均匀的发光测定法。该测定基于使用萤火虫萤光素酶来催化ATP和萤光素释放光的ATP的检测。它可以在化学发光酶标仪上以便利的96孔或384孔微量滴定板格式进行。该测定非常灵敏，可以检测50个细胞/孔。它具有稳定的半衰期超过2小时的发光信号。此ReadiUse 快速发光测定ATP测定试剂盒不含DTT。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Readiuse 快速发光法ATP检测试剂盒。
适用仪器
| 发光酶标仪 | |
| 推荐孔板: | 白色孔板 |
操作步骤
简要概述
1.用测试化合物（100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板）制备细胞（样品）
2.添加等量即用型ReadiUse 快速发光检测ATP检测试剂（100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板）
3.在室温下孵育10-20分钟
4.监测发光强度
注意：为达到佳效果，建议使用白色孔板。 在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。
制备
为方便起见，请使用在线稀释计算器
用ddH2O或适当的缓冲液制备1mM ATP储备溶液，然后进行连续稀释以达到10 pM至10μM的ATP浓度。
样品实验方案
表1.白色96孔微孔板中ATP标准品和测试样品的布局。 SD = ATP标准，BL =空白对照，TS =测试样品
| BL | BL | TS | TS |
| SD1 | SD1 | ... | ... |
| SD2 | SD2 | ... | ... |
| SD3 | SD3 | ... | ... |
| SD4 | SD4 | ... | ... |
| SD5 | SD5 | ... | ... |
| SD6 | SD6 | ... | ... |
| SD7 | SD7 | ... | ... |
表2.每个孔的试剂组成
| 孔板 | 规格 | 试剂 |
| SD1-SD7 | 100ul | 连续稀释ATP（例如10 pM至10μM） |
| BL | 100ul | ATP分析缓冲液（组分A） |
| TS | 100ul | 样品 |
2.将细胞板在37℃，5％CO2培养箱中孵育所需的时间段，例如24,48或96小时。
3.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的ReadiUse 快速发光测定ATP测定试剂。
5.用标准光度计监测发光强度。
| 图1.细胞数与发光信号相关。 使用ClaiStar板读数器（BMG Labtech）在96孔白板中使用ReadiUse Rapid Luminometric ATP Assay Kit测量不同的Jurkat细胞数（2倍稀释）。 该试剂盒可检测低至50个细胞。 在孵育15分钟或2小时后，发光信号和细胞数之间存在线性关系（r2> 0.99）。 发光信号的半衰期超过2小时。 |
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