ReadiUse 预活化 PE-Cy7 马来酰亚胺

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产品特点  

1.易于偶联：通过活化试剂，使其更容易与目标分子结合

2.操作便捷：预活化后，无需再进行复杂的活化步骤，可直接使用

3.多色检测能力：适用流式细胞术的多色成像，避免光谱重叠

适用范围

主要用于标记抗体

产品介绍

PE-Cy7 是一种常用于流式细胞术的串联染料。其主要吸收峰位于~565 nm，发射峰位于~780 nm。AAT Bioquest 提供预活化的 PE-Cy7马来酰亚胺，以便于将 PE-Cy7 串联偶联物与抗体及其他蛋白质（如链霉亲和素和其他二级试剂）进行偶联。该产品是通过交联剂 SMCC 制备而成。预活化 PE-Cy7 马来酰亚胺可以直接用于与还原抗体及其他含巯基生物分子的偶联反应。  

实验方案示例

IgG 的还原

1.在蒸馏水中新鲜配制 1.0 M DTT（15.4 mg/100 µL）溶液。为获得理想结果，抗体溶液浓度应不低于 2 mg/mL。还原反应可在不同缓冲液中进行，例如：MES、磷酸盐和 TRIS 缓冲液（pH 范围 6 至 8）。若抗体浓度低于 2 mg/mL，应进行浓缩。

2.每 100 µL 抗体溶液中加入 2 µL 的 1.0 M DTT 储备液，充分混匀。将抗体溶液在室温下静置 30 分钟，期间不再混合（以尽量减少半胱氨酸再氧化为胱氨酸）。

3.使用预平衡了含 2 mM EDTA 的 50 mM MES 缓冲液（pH=6.0-6.5）的脱盐柱纯化还原后的抗体。（脱盐柱：https://www.aatbio.com/products/readiuse-bio-gel-p-6-spin-column?unit=60500）

4.使用 Nanodrop 测量抗体浓度。（浓度（mg/ml）= A280nm / 1.4）注意：还原后的抗体不稳定；纯化后应尽快进行偶联反应。

与 ReadiUse™ 预活化 PE-Cy7 马来酰亚胺的偶联

1.将 ReadiUse™ 预活化 PE-Cy7 马来酰亚胺溶解在 100 µL ddH₂O 中，配制成 10 mg/mL 的溶液。

注意：溶解后的 ReadiUse™ 预活化 PE-Cy7 马来酰亚胺在 4°C 下可稳定保存一周，需避光保存。

2.按每 100 µg 还原抗体加入 250-300 µg PE-Cy7 的比例，将还原抗体直接加入到预活化的 PE-Cy7 中。

3.在室温下旋转混合 60-120 分钟。

4.60 分钟后，封闭抗体上的游离巯基。

5.新鲜配制 10 mg/mL 的 NEM（N-乙基马来酰亚胺）DMSO 溶液；每mg抗体加入 3.4 µL 该溶液，并在室温下旋转混合 20 分钟。

纯化

为获得理想性能，抗体/PE-Cy7 偶联物可通过尺寸排阻色谱法进一步纯化。

注意：建议将抗体/PE-Cy7 偶联物溶液储存于 2~8°C，并避免光照。