活细胞荧光示踪探针ReadiUse CFSE CAS 150347-59-4
| Ex (nm) | 498 | Em (nm) | 517 |
| 分子量 | 557.46 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
活细胞荧光示踪探针CFSE是美国AAT Bioquest生产的荧光示踪探针，人们普遍认为，细胞的荧光标记是确定总细胞数或样本中存在多少活细胞的有效手段。流式细胞术结合荧光染色是分析异质细胞群的有力工具。荧光素二乙酸酯 (FDA) 及其衍生物是非荧光分子，可扩散到细胞内并被细胞内非特异性酯酶水解产生荧光产物。荧光产物只能在细胞膜完整的细胞中积累；因此，带有渗漏膜的死细胞不会被染色。 FDA 及其类似物（如 CDCFDA）的膜转运和细胞内水解的动力学与细胞功能有关，因此 FDA 标记可用于通过流式细胞术或荧光显微镜监测细胞。 FDA 染料标记细胞的荧光强度在细胞系和菌株之间差异很大，可能是因为细胞内酯酶活性的差异。 CFSE 是一种胺反应性 FDA 衍生物，广泛用于使用流式细胞仪监测细胞增殖。 AAT Bioquest 为流式细胞仪提供了这种方便的包装尺寸。每个小瓶 CFSE 可以用 90 uL 无水 DMSO 重新配制为 10 mM 的储备浓度。 DMSO 原液应避光保存，并与干燥剂一起储存在 -20°C，避免冻融。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的活细胞荧光示踪探针CFSE。
操作步骤
1.准备10 mMDMSO储备溶液
对于＃22022：将5.6mg溶于1ml DMSO中以制备10mM储备溶液（1mg / ml相当于1.8mM）; 对于＃22028，向每个小瓶中加入90μLDMSO以制备10mM储备溶液。
注意：应及时使用原液; 任何剩余的溶液应等分并在< -20 o C冷冻。避免反复冻融循环，避免光照。
2.准备CFSE工作解决方案
在使用前准备CFSE 工作溶液（0.5至5μM），用Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液稀释来自步骤1 的DMSO储备液（2 000至2,000次），pH值7.通过涡旋混合均匀。
3.用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞：
3.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间。
3.2离心细胞，每管取1-5×10 5个细胞。
3.3将细胞重悬于500μL 染料工作溶液中（来自步骤2）。
3.4在室温或37 ° C 下用染料溶液孵育细胞10到30分钟，避光。
3.5从细胞中取出染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液清洗细胞。将细胞重悬于500μL预热的HHBS或培养基中，每管获得1-5×10 5个细胞。
3.6使用流式细胞仪（FL1通道） 或荧光显微镜监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光变化。
参考文献
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