ReadiLink Rapid mFluor Blue 570抗体标记试剂盒（标记50ug抗体）

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产品优势  

1.专为流式检测设计的大斯托克斯位移染料

2.即用型配方，标记过程无需纯化

 

适用范围

主要用于标记抗体 

 

产品介绍

AAT Bioquest公司开发的mFluor™系列染料专为流式细胞检测优化设计，具有大斯托克斯位移特性，可完美匹配流式细胞仪常规激光线（405 nm、488 nm及633 nm）。其中mFluor™  Blue 570染料的激发与发射峰分别位于~553 nm和~570 nm，是RPE标记蛋白理想替代品。mFluor™  Blue 570 SE（琥珀酰亚胺酯）具有良好稳定性，并能与蛋白质氨基基团发生高效、特异性的结合反应。

该试剂盒包含两次独立标记反应所需的全套组分，且无需柱纯化步骤。盒内提供的两管mFluor™  Blue 570 SE染料均经过优化，每管可高效标记约50 µg抗体。所得偶联物适用于多种应用，包括流式细胞术、荧光显微技术、免疫细胞化学（ICC）、免疫组织化学（IHC）、ELISA以及间接荧光原位杂交（FISH）。本试剂盒为小规模标记单克隆/多克隆抗体或其他大分子蛋白（>10 kDa）提供了便捷解决方案。

 

图1. ReadiLink™快速抗体标记流程示意图。该技术仅需两个简易步骤，且无需纯化操作，即可在一小时内完成微克级抗体的共价标记

实验前重要提示：

请将所有组分恢复至室温后短暂离心，开盖前确保管壁附着物完全沉降；所有工作液需现用现配，配制完成后请立即开始偶联反应。本操作方案为推荐流程，实际实验条件可根据具体研究需求进行优化调整（注：建议首次使用时严格遵循推荐方案以确保标记效率）

 

标准操作规程（标记50μg蛋白质）

将所有组分加热并在打开前将样品瓶短暂离心，并在开始结合前准备所需的溶液。

1.准备蛋白质溶液（溶液A）：

1.1 标记50µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg / mL）， 取50 µL目标蛋白溶液，加入5 µL反应缓冲液（组分B，占总体积10%）

注：如果您的蛋白质浓度不同，请相应调整蛋白质体积，使~50μg蛋白质可用于标记反应。

 

1.2 标记100µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg / mL），取100 µL目标蛋白溶液，加入10 µL反应缓冲液（组分B，占总体积10%）

 注：推荐使用pH 7.2-7.4的1X PBS缓冲液;

若蛋白溶解于甘氨酸缓冲液，需先透析至PBS或使用Millipore UFC501008超滤管（10 kDa截留分子量）去除游离氨基/铵盐（如硫酸铵、乙酸铵等）

 注：不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白（BSA）抗体或明胶标记效率显著降低。

 注：建议最终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL； 当浓度<1 mg/mL时偶联效率将显著下降。

 

2.偶联反应：

2.1 将蛋白质溶液（溶液A）加入到一瓶标记染料（组分A）中，通过反复移液几次将其混合均匀，或将小瓶涡旋几秒钟。

注： 若标记100 µg蛋白，需将蛋白样本均分为两份（各50 µg），分别与两管标记染料反应后合并。

2.2 将缀合反应混合物在室温下保持30-60分钟。

注：如果需要，可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。

 

3.终止偶联反应：

3.1   50 µg蛋白标记，加入5 µL TQ染料淬灭缓冲液（组分C）；

       100 µg蛋白标记，加入10 µL TQ染料淬灭缓冲液（组分C）；

        加入的缓冲液是总反应体积的10％。

3.2   混匀后室温静置10分钟，标记蛋白即可使用

 

4.蛋白偶联物的储存条件

蛋白质缀合物应在载体蛋白（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5 mg / mL的浓度存储。为了更长的存储时间，可以将蛋白质结合物冻干或分成单份使用，并存储在≤–20°C下。