ReadiLink iFluor 680抗体标记试剂盒（标记50ug抗体）

ReadiLink iFluor 680蛋白标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的便捷方法。该试剂盒仅需要两个简单的混合步骤而无需纯化步骤。 试剂盒中使用的iFluor 和mFluor 染料的琥珀酰亚胺酯（SE）显示出与蛋白质的脂族胺的良好反应性和选择性，并形成羧酰胺键，其与天然肽键相同且稳定。 iFluor 和mFluor-抗体缀合物可用于免疫荧光染色，荧光原位杂交，流式细胞术和其他生物学应用。 每个ReadiLink 抗体标记试剂盒都提供了进行两次偶联反应（2x50μg蛋白质）的所有必需成分。 每个试剂盒可用于标记50-100μg单克隆，多克隆抗体或其他蛋白质（> 10 kDa），只需两个简单的混合步骤。ReadiLink iFluor 680蛋白标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。

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实验前重要提示：

请将所有组分恢复至室温后短暂离心，开盖前确保管壁附着物完全沉降；所有工作液需现用现配，配制完成后请立即开始偶联反应。本操作方案为推荐流程，实际实验条件可根据具体研究需求进行优化调整（注：建议首次使用时严格遵循推荐方案以确保标记效率）

标准操作规程（标记50μg蛋白质）

将所有组分加热并在打开前将样品瓶短暂离心，并在开始结合前准备所需的溶液。

1.准备蛋白质溶液（溶液A）：

1.1 标记50g蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg / mL）， 取50 µL目标蛋白溶液，加入5 µL反应缓冲液（组分B，占总体积10%）

注：如果您的蛋白质浓度不同，请相应调整蛋白质体积，使~50μg蛋白质可用于标记反应。

1.2 标记100g蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg / mL），取100 µL目标蛋白溶液，加入10 µL反应缓冲液（组分B，占总体积10%）

 注：推荐使用pH 7.2-7.4的1X PBS缓冲液;

若蛋白溶解于甘氨酸缓冲液，需先透析至PBS或使用Millipore UFC501008超滤管（10 kDa截留分子量）去除游离氨基/铵盐（如硫酸铵、乙酸铵等）

 注：不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白（BSA）抗体或明胶标记效率显著降低。

 注：建议最终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL； 当浓度<1 mg/mL时偶联效率将显著下降。

2.偶联反应：

2.1 将蛋白质溶液（溶液A）加入到一瓶标记染料（组分A）中，通过反复移液几次将其混合均匀，或将小瓶涡旋几秒钟。

注： 若标记100 µg蛋白，需将蛋白样本均分为两份（各50 µg），分别与两管标记染料反应后合并。

2.2 将缀合反应混合物在室温下保持30-60分钟。

注：如果需要，可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。

3.终止偶联反应：

3.1   50 µg蛋白标记，加入5 µL TQ染料淬灭缓冲液（组分C）；

       100 µg蛋白标记，加入10 µL TQ染料淬灭缓冲液（组分C）；

        加入的缓冲液是总反应体积的10％。

3.2   混匀后室温静置10分钟，标记蛋白即可使用