ReadiLink KLH偶联试剂盒

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产品介绍

钥孔戚血蓝蛋白（Keyhole Limpet Hemocyanin, KLH）是抗体生产中最常用的多肽偶联载体蛋白之一。海养殖钥孔戚血蓝蛋白（Mariculture KLH, mcKLH）提取自Concholepas concholepas软体动物，其免疫原性与KLH相似，但作为半抗原和多肽抗体生产的载体蛋白具有更优异的稳定性和效率。该蛋白分子表面含有丰富的胺基和羧基反应位点，可通过相应交联剂实现与多肽及其他抗原的高效偶联，目前已成为半抗原/多肽抗体生产的行业金标准。

本ReadiLink™ KLH偶联试剂盒专为快速制备免疫用半抗原-载体蛋白偶联物而优化，采用羧基反应性碳二亚胺交联剂，通过一步法完成半抗原与载体蛋白的偶联。所得偶联物能有效激发针对半抗原的特异性免疫反应和抗体产生。其反应机制基于碳二亚胺与多肽/蛋白质表面暴露的羧基和氨基形成稳定共价键。

试剂盒核心组分包括：特殊缓冲体系配制的mcKLH（确保最佳碳二亚胺反应兼容性）

                                  高效脱盐离心柱（通过简易离心步骤即可实现＞90%的蛋白回收率）

样品实验方案

简要概述

1.准备蛋白质溶液
2.准备半抗原解决方案
3.将蛋白质与半抗原混合到EDC中
4.在室温下孵育反应2小时
5.通过脱盐来纯化缀合物

工作溶液配制

1. mcKLH溶液（10 mg / mL）：
将200μLddH2 O加入到mcKLH（组分A）的小瓶中以制备10mg / mL溶液。

注意：mcKLH溶液通常呈半透明至白蓝色。 不要涡旋或加热溶液，否则会使载体沉淀。

2. Hapten工作溶液：
在450μL缀合缓冲液（组分B）中溶解最多2mg半抗原。

注意：一些半抗原可能具有有限的溶解度，使用DMSO（在最终的缀合溶液中≤30％）首先溶解它。 较高浓度的DMSO可能使载体蛋白不可逆地变性。

3. KLH-Hapten工作溶液：
将450μL半抗原溶液加入200μLmcKLH溶液中，得到KLH-Hapten工作溶液。

操作步骤

1.KLH-Hapten结合

1.1将一小瓶EDC（组分C，10mg）溶解在1mL ddH 2 O中，立即将50μL该溶液加入KLH-Hapten工作溶液中，轻轻混合。在室温下孵育2小时。通过脱盐纯化缀合物以除去未反应的交联剂和蛋白质防腐剂（例如叠氮化钠）。

1.2拧下脱盐柱（组件E）的底部盖子，然后松开盖子。将色谱柱放入收集管中。

1.3将柱以1,000g离心2分钟以除去储存溶液。

1.4取下盖子，慢慢地向柱子中加入1 mL纯化缓冲液。以1,000g离心2分钟，取出缓冲液。再重复此步骤3次，从收集管中丢弃缓冲液。

1.5将色谱柱放入新的收集管中，轻轻地将样品放入紧凑树脂床的中心。

1.6将柱以1,000g离心2分钟以收集样品。

1.7KLH-Hapten缀合物现在可用于免疫。如果KLH-Hapten缀合物要储存超过几天，则无菌过滤缀合物，并储存在4°C或-20°C。

注意：如果在一周内使用缀合物，可以使用PBS进行纯化。如果缀合物将被冷冻，则使用纯化缓冲盐（组分D）进行纯化。如果在缀合中使用DMSO，则制备具有相同百分比的用于缀合的DMSO的纯化缓冲盐。这将使脱盐期间塔中的沉淀最小化。如果在缀合过程中形成沉淀，则将沉淀的材料离心，收集上清液并保存沉淀物。净化上清液。将沉淀物与纯化的缀合物合并。