ReadiLink iFluor 488 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒
英文名称：ReadiLink™ iFluor® 488 Nick Translation dsDNA Labeling Kit
产品参数
| Ex (nm) | 491 | Em (nm) | 516 |
| 分子量 | N/A | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
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产品介绍
ReadiLink™ iFluor® 488 缺口平移dsDNA标记试剂盒提供了一种简单高效的方法，可用明亮且光稳定的iFluor® 488染料标记双链DNA样本。该试剂盒包含DNA标记完整工作流程所需的全部试剂。
其原理基于DNA酶与DNA聚合酶的协同作用：在DNA螺旋的一条链上制造缺口，并将iFluor® 488染料耦联至缺口位点。此外，用户可通过调整iFluor® 488-dUTP偶联物与dTTP的比例，优化标记掺入效率及产物大小。本品兼容多种样本材料，包括细菌人工染色体（BAC）DNA、人基因组DNA、纯化PCR产物、超螺旋及线性化质粒DNA。所得的iFluor® 488标记DNA可应用于荧光原位杂交（FISH）等多种分子生物学技术。
实验方案
样品实验方案
简要概述
- 准备 DNA 样本
- 将试剂添加到试管中
- 短暂混合并离心
- 在 15°C 下孵育 60 分钟
- 将反应置于冰上，然后在65°C下添加停止溶液并加热
- 使用前在冰上放置 5 分钟或在 4°C 下储存
- 纯化标记的 DNA
注：在开始实验之前，解冻所有成分。在开始标记过程之前，将所有试剂短暂涡旋至底部。
实验步骤
表 1. 各反应每管试剂组成
| 成分 | 规格 |
| DNA样本 | 1 µg DNA 在无核酸酶水中稀释至终体积 34 µL |
| Nick Translation 缓冲液 | 5 µL |
| dNTP 混合物 | 5 µL |
| dTTP | 2 µL |
| iFluor 488-dUTP 工作溶液 | 2 µL |
| DNA聚合酶I | 1 µL |
| DNA酶I | 1 µL |
| 总容积 | 50 µL |
iFluor™488-dUTP（组分A）与dTTP（组分E）的比例可进行优化，以获得理想标记效果。
孵育时间可优化以改善标记效率。延长孵育时间有助于提高标记率，但可能导致终产物片段缩短。
孵育时间可优化以改善标记效率。延长孵育时间有助于提高标记率，但可能导致终产物片段缩短。
实验操作步骤
1.向干净的（无核酸酶）0.5 mL 微型离心管或 0.2 mL PCR 管中，按表 1 中所示的顺序加入试剂。
2.短暂涡旋混匀试剂后快速离心
3.将反应在 15°C 下孵育 60 分钟。
4.孵育后，将反应置于冰上。
5.终止反应：加 5 µL终止液，65℃加热样本
6.使用前在冰上放置 5 分钟或在 4°C 下储存。
7.纯化标记后的 DNA。
