RatioWorks PDMPO,右旋糖酐

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适用范围

细胞pH值检测

 

产品介绍

现有pH探针在酸性细胞器（如溶酶体、内吞体、吞噬体、精子细胞和顶体）研究中存在明显局限，因其荧光信号在低pH环境下会显著减弱。尽管比率成像技术在过去几十年备受关注，但适用于酸性细胞器的荧光探针的缺乏严重制约了该技术的发展潜力

RatioWorks™ PDMPO是一种酸向性双激发/双发射pH探针，pKa值为4.47，特别适合酸性细胞器研究，低pH下发射强黄色荧光，高pH下呈现强蓝色荧光，大斯托克斯位移和优异的光稳定性，可被405nm紫激光有效激发（适用于流式细胞术）

该探针为研究活细胞内吞作用、吞噬作用及酸性细胞器提供了全新工具。其琥珀酰亚胺酯（SE）形式可便捷制备多种生物偶联物，用于成像或流式检测，能显著降低信号变异度并提高吞噬/内吞检测的准确性。这些偶联物还可与绿色荧光染料（如GFP、Fluo-8、钙黄绿素或FITC标记抗体）进行多重细胞功能分析。

 

操作步骤

1.根据需要准备细胞。

将贴壁细胞按以下密度铺板过夜：

96孔板：40,000-80,000细胞/孔（100 µL培养基）

384孔板：10,000-20,000细胞/孔（25 µL培养基）

注：需根据细胞系特性优化接种密度

 

储备液的配制

除非另有说明，所有未用完的库存溶液应在制备后分装成单次使用的小份并储存在-20 °C。避免反复冻融。

RatioWorks™ PDMPO 葡聚糖储备液

取1 mg RatioWorks™ PDMPO葡聚糖溶解于1 mL无菌水或HHBS缓冲液（含20 mM Hepes）

注意： 1.储存液应尽快使用。任何未使用的溶液需要分装并冷冻保存在< -20 °C。避免反复冻融

           2.某些细胞可能需要配制50 mg/mL的储存液以供进一步稀释。

 

工作溶液的配制

RatioWorks™ PDMPO葡聚糖工作液

使用HHBS缓冲液将RatioWorks™ PDMPO葡聚糖稀释至20-100 µg/mL，作为标准染色工作液。

特殊细胞处理： 部分细胞类型可能需要更高浓度（1-5 mg/mL）的工作液，请根据实验需求调整。

 

内吞作用检测实验方案

本方案为标准细胞负载推荐流程，具体实验条件需根据实际需求调整。

1.移除培养基，按以下体积加入RatioWorks™ PDMPO葡聚糖负载溶液：

                      96孔板：100 µL/孔

                       384孔板：25 µL/孔

注意事项：1.若待测化合物与血清存在相互作用，须在染料负载前用HHBS缓冲液替换生长培养基（96孔板100 µL/孔，384孔板25 µL/孔）

                 2.RatioWorks™ PDMPO葡聚糖会快速从早期内体转运至晚期内体并与溶酶体融合。为增强内体可视化效果，建议提高标记浓度，缩短负载时间，立即进行成像

2.将负载染料的细胞培养板置于37℃培养箱中孵育5-20分钟

注：某些细胞类型可能需要长达48小时的孵育时间

3.洗涤细胞并更换为HHBS缓冲液或生长培养基

4.进行内吞检测

激发波长：360 nm

双发射检测：450 nm和540 nm（用于比率测定）