RatioWorks PDMPO,右旋糖酐
| Ex (nm) | 333 | Em (nm) | 531 |
| 分子量 | ~10000 | 溶剂 | Water |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
RatioWorks PDMPO,右旋糖酐是美国AAT Bioquest生产的用于溶酶体pH检测的荧光探针，现有的pH探针不适合研究酸性细胞器，如溶酶体，内体，吞噬体，精子和顶体，因为它们的荧光在较低的pH下会显着降低。虽然比率成像在过去几十年中受到了密切关注，但比率成像的增长潜力受到缺乏适合酸性细胞器的荧光探针的限制。RatioWorks PDMPO的特点是酸性双激发和双发射pH探头。它在较低的pH下发出强烈的黄色荧光，并在较高的pH下产生强烈的蓝色荧光。这种独特的pH依赖性荧光使RatioWorks PDMPO成为酸性细胞器的理想pH探针，pKa = 4.47。另外，RatioWorks PDMPO具有极大的斯托克斯位移和出色的光稳定性，使其成为荧光成像和流式细胞仪应用的优异荧光酸性试剂。RatioWorks PDMPO独特的荧光特性可能为研究人员提供了一种新工具，可用于研究细胞内吞作用，吞噬作用和活细胞的酸性细胞器。用于流式细胞仪应用的紫外激光在405 nm处可以很好地激发RatioWorks PDMPO。这种RatioWorks PDMPO SE可以很容易地用于制造用于成像或流动应用的各种生物共轭物，从而能够通过降低信号变异性和提高准确度来特异性检测吞噬作用和胞吞作用。这些缀合物还可用于与绿色染料如GFP，Fluo-8，钙黄绿素或FITC标记的抗体多重化细胞功能分析。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的RatioWorks PDMPO,右旋糖酐。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 360 nm |
| Em： | 450、540 nm |
| Cutoff： | 420、475 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式: | 底读模式 |
操作步骤
1.根据需要准备细胞。例如，将贴壁细胞在生长培养基中以40,000至80,000细胞/孔/100μL过夜
对于384孔板，96孔或10,000至20,000个细胞/孔/25μL。
注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定佳细胞密度。
2.准备RatioWorks PDMPO葡聚糖：
2.1在1 mL 无菌水或Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）中制备1mg / mL RatioWorks PDMPO葡聚糖原液。应立即使用原液。任何未使用的溶液需要等分并在< -20 o C重新冷冻。
注意：避免反复冻融循环，避免光照。
2.2在HHBS中制备20-100ug / mL RatioWorks PDMPO葡聚糖加载溶液。
3.运行内吞作用测定
3.1取出培养基，将100μL/孔（96孔板）或25μL /孔（384孔板） RatioWorks PDMPO葡聚糖加样溶液加入细胞板（步骤2.2）。
注1：如果您的化合物干扰血清，重要的是用HHBS缓冲液替换生长培养基（96孔板100μL/孔或染料加载前384孔板25μL/ 孔）。
注2：可以发生RatioWorks PDMPO葡聚糖从早期内体到晚期内体的快速运输以及随后与溶酶体的融合。为了帮助在内体中显示RatioWorks PDMPO葡聚糖，我们建议增加标记浓度并减少加载时间，并立即成像。
3.2将染料加载板在细胞培养箱中孵育5至20分钟。
3.3用HHBS或生长培养基清洗并更换染料加载溶液。
3.4通过监测Ex = 360nm处的荧光和Em = 450和540nm 的比率测量来进行胞吞作用测定。
参考文献
iTRAQ-based proteomic analysis of the metabolism mechanism associated with silicon response in the marine diatom Thalassiosira pseudonana
Authors: Chao Du, Jun-Rong Liang, Dan-Dan Chen, Bin Xu, Wen-Hao Zhuo, Ya-Hui Gao, Chang-Ping Chen, Chris Bowler, Wen Zhang
Journal: Journal of proteome research (2014): 720--734
