pH荧光探针Protonex 绿 500 Dextran检测胞吞作用

Protonex 绿 500 Dextran 是美国AAT Bioquest生产的用于检测胞吞的荧光探针，Protonex Green染料显示出pH依赖性荧光。与大多数在较高pH下荧光更强的荧光染料不同，酸性条件可增强Protonex Green染料的荧光。随着pH从中性降低到酸性，Protonex Green染料的荧光增加。细胞外缺乏荧光消除了洗涤步骤。Protonex 绿色染料为监测酸性细胞区室（如内体和溶酶体）提供了强大的工具。Protonex Green染料在细胞外是非荧光的，但在酸性区室（如吞噬体，溶酶体和内体）中发出明亮的绿色荧光。Protonex Green可以对细胞酸性隔室进行特异性检测，降低信号可变性，提高成像或流量应用的准确度。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Protonex 绿 500 Dextran 检测胞吞作用。 

点击查看光谱

操作步骤

1.根据需要准备细胞。例如，将贴壁细胞在生长培养基中以40,000至80,000细胞/孔/100μL过夜  

对于384孔板，96孔或10,000至20,000个细胞/孔/25μL。

注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定佳细胞密度。

2.准备RatioWorks Protonex 绿色葡聚糖装载解决方案：

2.1在1 mL 无菌水或Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）中制备1mg / mL Protonex 绿色葡聚糖原液。应立即使用原液。任何未使用的溶液需要等分并在< -20 ^o C重新冷冻。

注意：避免反复冻融循环，避免光照。

2.2在HHBS中制备20-100ug / mL Protonex 绿色葡聚糖加载溶液。

3.运行内吞作用测定

3.1取出培养基，将100μL/孔（96孔板）或25μL /孔（384孔板） Protonex Green Dextran 上样溶液加入细胞板（步骤2.2）。

注1：如果您的化合物干扰血清，重要的是用HHBS缓冲液替换生长培养基（96孔板100μL/孔或染料加载前384孔板25μL/ 孔）。

注2： Protonex 绿色葡聚糖从早期内体快速运输到晚期内体，随后可能与溶酶体融合。为了帮助在内体中可视化Protonex 绿色葡聚糖，我们建议增加标记浓度并减少加载时间，并立即成像。

3.2将染料加载板在细胞培养箱中孵育5至20分钟。

3.3用HHBS或生长培养基清洗并更换染料加载溶液。

3.4通过监测Ex / Em = 443/505 nm处的荧光来进行胞吞作用测定。

参考文献

PHD2 is a regulator for glycolytic reprogramming in macrophages
Authors: Annemarie Guentsch, Angelika Beneke, Lija Swain, Katja Farhat, Shunmugam Nagarajan, Ben Wielockx, Kaamini Raithatha, Jan Dudek, Peter Rehling, Anke Zieseniss
Journal: Molecular and Cellular Biology (2016): MCB--00236

相关产品