PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒* DTT - Free*

PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测ATP的试剂盒，腺苷三磷酸（ATP）在细胞能量学，代谢调节和细胞信号传导中起重要作用。 PhosphoWorks ATP检测试剂盒提供快速，简单和均匀的发光检测，用于测定哺乳动物细胞中的细胞增殖和细胞毒性。 可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式进行测定。 该测定的高灵敏度允许在许多生物系统，环境样品和食物中检测ATP。 该PhosphoWorks ATP检测试剂盒不使用DTT，并且具有长达4小时的稳定发光信号。 它具有稳定的发光，不需要混合或分离，并配制成具有小的手动操作时间。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒。 

操作步骤

简要概述

1.用测试化合物（100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板）制备细胞（样品）
2.加入等体积的ATP工作溶液（100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板）
3.在室温下孵育10-20分钟
4.监测发光强度

 

制备工作溶液

1.将10 mL反应缓冲液（组分C）转移到ATP传感器（组分B）中并充分混合。

2.将20μLATP监测酶（组分A）加入到组分B + C的瓶中并充分混合以制备ATP工作溶液。 注意：避免来自外源生物来源的潜在ATP污染。

有关细胞样品制备的指南（点击查看）

 

样品实验方案

1.运行ATP测定：

1.1用测试化合物处理细胞（或样品），在96孔板中加入10μL10X化合物，或在所需化合物缓冲液中加入5μL5X化合物用于384孔板。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。

1.2将细胞板在37℃，5％CO 2培养箱中孵育所需的一段时间，例如24,48或96小时。

1.3向每个孔中加入100μL（96孔板）或25μL（384孔板）的ATP工作溶液。

1.4在室温下孵育10-20分钟。

1.5用标准发光计监测发光强度。

 

2.生成标准ATP校准曲线：

        如果需要计算样品中ATP的绝对量，则应与上述分析一起生成ATP标准曲线。

2.1通过包含不含ATP的样品（作为对照）在含有0.1％BSA的PBS缓冲液中制备ATP系列稀释液以测量背景发光。注意：通常ATP浓度范围为0.1 nM至1μM是合适的。

2.2将相同量的稀释的ATP溶液加入空板中（对于96孔板为100μL或对于384孔板为25μL）。

2.3加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的ATP工作溶液。

2.4将反应混合物在室温下孵育10至20分钟。

2.5用标准发光计记录发光强度。

2.6生成ATP标准曲线。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数（RLU）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算ATP样品。 我们建议使用在线线性回归计算器，该计算器可在以下位置找到：

图1.使用NOVOstar板读数器（BMG Labtech）在96孔白板上用PhosphoWorks TM发光ATP测定试剂盒* DTT-Free *测量ATP剂量响应。 该试剂盒可在20分钟内检测到（3 pmole /孔）0.03 nM ATP。 积分时间为1秒。 半衰期超过2小时。

 

参考文献

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