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OxiVision Green 过氧化氢(H2O2)检测探针

英文名称:OxiVision™ Green hydrogen peroxide sensor
产品参数
Ex (nm)498Em (nm)517
分子量~600溶剂DMSO
存储条件在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

OxiVision Green 过氧化氢(H2O2)检测探针是美国AAT Bioquest生产的用于检测过氧化氢的荧光探针,尽管H2O2对人类健康和疾病具有重要意义,但由于缺乏可用于活细胞的敏感和特异性H2O2检测探针,其产生,积累,运输和功能的分子机制尚未充分了解。目前可用的H2O2响应探针的局限性包括来自其他ROS的干扰背景荧光,对外部活化酶的需要,缺乏水溶性或相容性,和/或紫外区域中的激发谱。OxiVision Green 过氧化氢探针无荧光,在可见光区域无吸收。加入H2O2会引起迅速的荧光增加,伴随着可见波长吸收带的增长。由于其二元吸收/发射响应,该探针具有大的动态范围。OxiVision Green 过氧化氢探针的荧光响应是H2O2选择性的。与相似的ROS(如O2-,NO或-OCl)相比,OxiVision Green 过氧化氢探针对H2O2的选择性> 100倍。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的OxiVision Green 过氧化氢(H2O2)检测探针。 注:该产品溶解需要60分钟左右。检测限:30-100μM。

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实验方案

操作步骤

1.准备OxiVision Green 过氧化氢:

1.1在高质量无水DMSO中制备2至5 mM OxiVision Green 过氧化氢储备液。应及时使用原液; 任何剩余的溶液应等分并冷冻于-20℃.

注意:避免反复冻融循环。

1.2准备2X OxiVision Green 过氧化氢工作溶液:在实验当天,将OxiVision Green 过氧化氢固体溶解在DMSO中,或将等份的原液溶解至室温。在20 mM Hepes缓冲液或您选择的缓冲液(pH 7)中制备浓度范围为2至20μM的2X工作溶液。建议使用终浓度为5μM的OxiVision Green 过氧化氢测量溶液中H 22浓度。

 

2.在上清液中运行H2 O 2测定:

2.1将50μL的2X OxiVision Green 过氧化氢工作溶液(来自步骤1.2)添加到H 2 O 2标准品,空白对照和测试样品的每个孔中,使总 H 2 O 2测定体积为  100μL /好。

注意:对于384孔板中,添加样品的25μL和25μL 2X OxiVision绿色 过氧化氢工作液到每个孔中。

2.2在室温下孵育反应15至60分钟,避光。

2.3用Ex / Em = 490 / 525nm 的荧光板读数器监测荧光增加。

2.4空白孔中的荧光(仅含测定缓冲液)用作对照,并从具有H 2 O 2反应的那些孔的值中减去。

 

3.在活细胞中运行H2 O 2测定:

OxiVision Green 过氧化氢可被动加载到活细胞中,并报告细胞内H 2 O 2浓度的微摩尔变化。以下是建议的显微镜成像方案,可根据您的具体研究需要进行修改。

3.1所述的OxiVision绿色过氧化氢的工作溶液应该作为步骤1.2来制备。

3.2根据需要处理细胞。

3.3用 OxiVision Green 过氧化氢工作溶液孵育细胞5到60分钟。用PBS缓冲液洗涤细胞两次。

3.4使用具有底部读取模式的荧光酶标仪检测Ex / Em = 490 / 525nm 处的荧光。或者使用FITC通道通过荧光显微镜检查荧光变化。

 

参考文献

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