MycoLight 快速荧光细菌革兰染色试剂盒

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产品介绍

MycoLight™ 快速荧光细菌革兰氏染色试剂盒为活菌革兰氏阴阳性鉴定提供了一种简便高效的解决方案。革兰氏染色作为临床与研究领域的常用分类方法，可将细菌划分为两大类别。然而传统染色流程操作繁琐且需固定菌体，这对需后续分析的活菌研究造成明显局限。

MycoLight™ 快速荧光细菌革兰氏染色试剂盒通过一步法活菌染色有效克服传统方法的固有缺陷，其采用两种具有差异化染色特性的DNA染料：MycoLight™ Green可同时标记革兰氏阳性与阴性菌，而MycoLight™ Red则优先标记革兰氏阳性菌。两种染料的光谱特性分别为：MycoLight™ Green（Ex/Em≈484/504 nm），MycoLight™ Red（Ex/Em≈650/669 nm）。 

样品实验方案

简要概述

1.准备细菌样本

2.准备并将MycoLight 染料工作溶液添加到细菌样品中

3.在室温下与MycoLight 染料工作溶液避光孵育15分钟

4.使用FITC和Cy5滤光片组通过荧光显微镜或荧光光谱分析样品

储备液配制

除非另有说明，所有储备液应分装为单次用量并于-20°C冻存，避免反复冻融。

MycoLight™ Red储备液

向MycoLight™ Red（组分B）瓶中加入100 µL超纯水（ddH₂O），充分混匀。

*注：储备液需-20°C避光保存，建议分装为小份以避免反复冻融。*

工作液配制

MycoLight™染料工作液

取等体积MycoLight™ Green（组分A）与MycoLight™ Red储备液混合，充分混匀。

样品示例及操作

细菌样品的制备

1.将细菌培养至对数生长后期，调整浓度至约10⁷ cells/mL期。

注意：通过OD600值换算细胞数（大肠杆菌OD600=1.0约等于8×10⁸ cells/mL）*

2.离心去除培养基（10,000 × g，10分钟），用超纯水重悬菌体并调整浓度至~10⁷ cells/mL。

染色方案

1.向100 µL细菌悬液中加入2 µL MycoLight 染料工作溶液。

2.充分混合并在室温避光孵育15分钟。

3.离心去除工作液（10,000 × g，10分钟）。

4.用ddH2O重悬菌体沉淀。

5.通过FITC通道（Ex/Em=488/530 nm）检测革兰氏阴性菌，Cy5通道（Ex/Em=650/669 nm）检测革兰氏阳性菌。

注1：本方案为基础指南，请根据菌株特性或实验需求优化。

注2：也可使用荧光光谱法通过本试剂盒估算样本中革兰氏阴阳性菌的比例

试剂应用文献

In vitro efficacy of Er: YAG laser-activated irrigation versus passive ultrasonic irrigation and sonic-powered irrigation for treating multispecies biofilms in artificial grooves and dentinal tubules: an SEM and CLSM study