mFluor UV375琥珀酰亚胺酯
| Ex (nm) | 351 | Em (nm) | 387 |
| 分子量 | 782.95 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
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产品优势
1.简单快速，强大的生物分子标记，结合率高
2.荧光亮度、光稳定性、溶解性好，不受pH值影响
3.大的斯托克斯位移
适用范围
标记抗体蛋白质和其他生物分子，用于流式细胞仪
产品介绍
AAT Bioquest 的 mFluor™ 染料专为多色流式细胞术应用而研发。这些染料具有较大的斯托克斯位移，并且可以被流式细胞仪的激光线（例如355 nm、405 nm、488 nm和633 nm）很好地激发。 mFluor™ UV375 (MFUV375) 染料的荧光激发和发射最大值分别为 ~355 nm 和 ~375 nm。这些光谱特性使它们成为 BD Biosciences 的 BUV395 的替代品。 mFluor™ UV375 染料被 355 nm 的紫外激光很好地激发，发射中心在 375 nm 附近，这与 BUV 395 所用的 379/28 nm 滤光片组匹配。与聚合物的 BUV 395 染料相比，MFUV375 是一种小型且易与抗体缀合的有机分子。它比 BUV395 暗得多，可用于更亮的标记（例如 CD4）。
标准操作规程（标记50μg蛋白质）
将所有组分加热并在打开前将样品瓶短暂离心，并在开始结合前立即准备所需的溶液。 以下SOP是标记抗HDAC IgG抗体的实例。
1.准备蛋白质溶液（溶液A）：
为了标记50g蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg / mL），将5L（总反应体积的10％）的反应缓冲液（组分B）与50L目标蛋白质溶液混合。
注1.如果您的蛋白质浓度不同，请相应调整蛋白质体积，使~50μg蛋白质可用于标记反应。
注2：为了标记100g蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg / mL），将10μL（总反应体积的10％）反应缓冲液（组分B）与100μL目标蛋白质溶液混合。
注3：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中;如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中，必须用1X PBS（pH 7.2-7.4）透析，或使用Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜，10 kDa（来自Millipore的cat＃UFC501008）去除游离胺或铵盐（如硫酸铵和乙酸铵）广泛用于蛋白质沉淀。
注4：用牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的不纯抗体或抗体不能很好地标记。
注5：如果蛋白质浓度小于1 mg / mL，则结合效率显着降低。为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL。
2.运行结合反应：
2.1将蛋白质溶液（溶液A）加入一瓶标记染料（组分A）中，通过反复移液几次将其混合均匀，或将小瓶涡旋几秒钟。
注意：使用标记染料的两个小瓶（组分A）通过将100μg蛋白质分成2x50μg蛋白质并使每个50μg蛋白质与一小瓶标记染料反应来标记100μg蛋白质。 将两个小瓶合并用于下一步。
2.2将缀合反应混合物在室温下保持30-60分钟。
注意：如果需要，可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。
3.停止共轭反应：
3.1添加5 L（对于50μg蛋白质）或10L（对于100μg蛋白质），其为TQ染色猝灭缓冲液（组分C）的总反应体积的10％到缀合反应混合物中（来自步骤2.2），将它们混合好。
3.2在室温下孵育10分钟。
3.3标记的蛋白质（抗体）现在可以使用了。
参考文献
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Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
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Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011--E2018
Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
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