英文flag致电:029-68064558
搜索

钙离子荧光探针Mag-Fura-2, AM CAS 130100-20-8

英文名称:Mag-Fura-2, AM *Cell-permeant*
产品参数
Ex (nm)336Em (nm)505
分子量722.56溶剂DMSO
存储条件在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Mag-Fura-2, AM 是一种细胞内镁指示剂,具有比例且可紫外光激发。它的光谱特性与 Fura-2 非常匹配。这种乙酰氧基甲基 (AM) 酯形式可用于非侵入性细胞内装载。它还用于测量活细胞中高水平的钙离子。

点击查看光谱

 

适用仪器


荧光显微镜  
Ex: Fura2 滤波片组
Em: Fura2 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板

 


荧光酶标仪  
Ex: 340,380 nm
Em: 510 nm
Cutoff: 475 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底读模式/可分液处理
实验方案

实验方案

储备溶液配制

在高质量无水DMSO制备2至5 mM 的Mag-Fura-2 AM中储备溶液。

 

工作溶液配制

Mag-Fura-2 AM工作溶液
1.在实验当天,将Mag-Fura-2 AM溶解在DMSO中,或将指示剂储备溶液的等分试样解冻至室温。

2.在含有0.04%Pluronic®F-127的缓冲液(例如Hanks和Hepes缓冲液)中制备2至20µM Mag-Fura-2 AM工作溶液。对于大多数细胞系,建议使用最终浓度为4-5μM的Mag-Fura-2 AM。细胞负载所需指示剂的确切浓度请根据经验确定。

注:非离子洗涤剂Pluronic F-127用于提高Mag-Fura-2 AM的水溶性。可从百萤购买各种Pluronic F-127溶液。
注:如果你的细胞含有有机阴离子转运蛋白,可以将丙磺舒(1-2mM)添加到染料工作溶液中(最终井内浓度为0.5-1mM),以减少酯化指示剂的泄漏。多种形式的丙磺舒产品,包括水溶性、钠盐和稳定溶液,可从百萤购买。

 

操作步骤

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。本方案仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

1.在生长培养基中培养细胞过夜。
2.第二天,将1X Mag-Fura-2 AM工作溶液添加到孔板中。
注意:如果你的化合物干扰血清,在染色前用新鲜的HHBS缓冲液代替生长培养基。
3.将加入染料的孔板在37°C的细胞培养箱中培养30至60分钟。
注:将染料培养2小时以上可以提高某些细胞系的信号强度。
4.用HHBS或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如1mM丙磺舒)代替染料工作溶液,以去除任何多余的探针。
5.根据需要添加刺激剂,同时使用配备 Fura 2 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统(如 FlexStation)的荧光酶标仪检测荧光,Ex/Em1 =​​ 340/510 nm Cutoff 475 nm 和Ex/Em2 = 380/510 nm Cutoff 475 nm。

 

参考文献

Tuning the Spectroscopic Properties of Ratiometric Fluorescent Metal Indicators: Experimental and Computational Studies on Mag-Fura-2 and Analogues
Authors: Zhang G, Jacquemin D, Buccella D.
Journal: J Phys Chem B. (2017)
 
Fluorescence measurements of free [Mg2+] by use of mag-fura 2 in Salmonella enterica
Authors: Froschauer EM, Kolisek M, Dieterich F, Schweigel M, Schweyen RJ.
Journal: FEMS Microbiol Lett (2004): 49
 
Ionic selectivity of low-affinity ratiometric calcium indicators: mag-Fura-2, Fura-2FF and BTC
Authors: Hyrc KL, Bownik JM, Goldberg MP.
Journal: Cell Calcium (2000): 75
 
Mag-Fura-2 (Furaptra) exhibits both low (microM) and high (nM) affinity for Ca2+
Authors: Martinez-Zaguilan R, Parnami J, Martinez GM.
Journal: Cell Physiol Biochem (1998): 158
 
Intracellular Mg2+ regulation in voltage-clamped Helix aspersa neurones measured with mag-fura-2 and Mg(2+)-sensitive microelectrodes
Authors: Kennedy HJ., undefined
Journal: Exp Physiol (1998): 449
 
Characterization of Mg2+ transport in brush border membrane vesicles of rabbit ileum studied with mag-fura-2
Authors: Juttner R, Ebel H.
Journal: Biochim Biophys Acta (1998): 51
 
Monitoring of Ca2+ release from intracellular stores in permeabilized rat parotid acinar cells using the fluorescent indicators Mag-fura-2 and calcium green C18
Authors: Tojyo Y, Tanimura A, Matsumoto Y.
Journal: Biochem Biophys Res Commun (1997): 189
 
Effects of monovalent cations, pH and temperature on the dissociation constant (KD) for the fluorescent indicator mag-fura-2 at different excitation wavelengths
Authors: Howarth FC, Singh J, Waring JJ, Hustler BI, Bailey M.
Journal: Magnes Res (1995): 299
 
Intrasynaptosomal free Mg2+ concentration measured with the fluorescent indicator mag-fura-2: modulation by Na+ gradient and by extrasynaptosomal ATP
Authors: Garcia-Martin E, Martin-Romero FJ, Gutierrez-Merino C.
Journal: J Neurochem (1995): 2757
 
Determination of cytosolic Mg2+ activity and buffering in BC3H-1 cells with mag-fura-2
Authors: Grubbs RD, Walter A.
Journal: Mol Cell Biochem (1994): 11