钙离子荧光探针Mag-Fura-2, AM CAS 130100-20-8
Ex (nm) | 336 | Em (nm) | 505 |
分子量 | 722.56 | 溶剂 | DMSO |
存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
Mag-Fura-2, AM 是一种细胞内镁指示剂,具有比例且可紫外光激发。它的光谱特性与 Fura-2 非常匹配。这种乙酰氧基甲基 (AM) 酯形式可用于非侵入性细胞内装载。它还用于测量活细胞中高水平的钙离子。
适用仪器
荧光显微镜 | |
Ex: | Fura2 滤波片组 |
Em: | Fura2 滤波片组 |
推荐孔板: | 黑色透明底板 |
荧光酶标仪 | |
Ex: | 340,380 nm |
Em: | 510 nm |
Cutoff: | 475 nm |
推荐孔板: | 黑色透明底板 |
读取模式: | 底读模式/可分液处理 |
实验方案
储备溶液配制
在高质量无水DMSO制备2至5 mM 的Mag-Fura-2 AM中储备溶液。
工作溶液配制
Mag-Fura-2 AM工作溶液
1.在实验当天,将Mag-Fura-2 AM溶解在DMSO中,或将指示剂储备溶液的等分试样解冻至室温。
2.在含有0.04%Pluronic®F-127的缓冲液(例如Hanks和Hepes缓冲液)中制备2至20µM Mag-Fura-2 AM工作溶液。对于大多数细胞系,建议使用最终浓度为4-5μM的Mag-Fura-2 AM。细胞负载所需指示剂的确切浓度请根据经验确定。
注:非离子洗涤剂Pluronic F-127用于提高Mag-Fura-2 AM的水溶性。可从百萤购买各种Pluronic F-127溶液。
注:如果你的细胞含有有机阴离子转运蛋白,可以将丙磺舒(1-2mM)添加到染料工作溶液中(最终井内浓度为0.5-1mM),以减少酯化指示剂的泄漏。多种形式的丙磺舒产品,包括水溶性、钠盐和稳定溶液,可从百萤购买。
操作步骤
以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。本方案仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。
1.在生长培养基中培养细胞过夜。
2.第二天,将1X Mag-Fura-2 AM工作溶液添加到孔板中。
注意:如果你的化合物干扰血清,在染色前用新鲜的HHBS缓冲液代替生长培养基。
3.将加入染料的孔板在37°C的细胞培养箱中培养30至60分钟。
注:将染料培养2小时以上可以提高某些细胞系的信号强度。
4.用HHBS或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如1mM丙磺舒)代替染料工作溶液,以去除任何多余的探针。
5.根据需要添加刺激剂,同时使用配备 Fura 2 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统(如 FlexStation)的荧光酶标仪检测荧光,Ex/Em1 = 340/510 nm Cutoff 475 nm 和Ex/Em2 = 380/510 nm Cutoff 475 nm。
参考文献
Authors: Zhang G, Jacquemin D, Buccella D.
Journal: J Phys Chem B. (2017)
Authors: Froschauer EM, Kolisek M, Dieterich F, Schweigel M, Schweyen RJ.
Journal: FEMS Microbiol Lett (2004): 49
Authors: Hyrc KL, Bownik JM, Goldberg MP.
Journal: Cell Calcium (2000): 75
Authors: Martinez-Zaguilan R, Parnami J, Martinez GM.
Journal: Cell Physiol Biochem (1998): 158
Authors: Kennedy HJ., undefined
Journal: Exp Physiol (1998): 449
Authors: Juttner R, Ebel H.
Journal: Biochim Biophys Acta (1998): 51
Authors: Tojyo Y, Tanimura A, Matsumoto Y.
Journal: Biochem Biophys Res Commun (1997): 189
Authors: Howarth FC, Singh J, Waring JJ, Hustler BI, Bailey M.
Journal: Magnes Res (1995): 299
Authors: Garcia-Martin E, Martin-Romero FJ, Gutierrez-Merino C.
Journal: J Neurochem (1995): 2757
Authors: Grubbs RD, Walter A.
Journal: Mol Cell Biochem (1994): 11