LysoBrite 溶酶体红色荧光探针

LysoBrite 溶酶体红色荧光探针，用于标记活细胞的溶酶体。专有的溶解性染料可能通过溶酶体pH梯度选择性地积聚在溶酶体中。 溶质指示剂是疏水性化合物，易于渗透完整的活细胞，并在进入细胞后被捕获在溶酶体中。 进入溶酶体后，LysoBrite 试剂的荧光明显增强。 可以使用荧光成像，高含量成像，酶标仪荧光测定法或流式细胞术检测荧光。 LysoBrite 橙色，红色，深红色和NIR试剂具有高的光稳定性和优异的细胞保留性，可用于各种研究，包括细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞活力，细胞凋亡和细胞毒性。 它们适用于增殖和非增殖细胞，可用于悬浮细胞和贴壁细胞。溶酶体是细胞器，其含有酸水解酶以分解废物和细胞碎片。 溶酶体消化多余的或破旧的细胞器，食物颗粒和吞噬的病毒或细菌。 溶酶体周围的膜允许消化酶在pH4.5下工作。 与微碱性胞质溶胶（pH 7.2）相比，溶酶体的内部是酸性的（pH 4.5-4.8）。 溶酶体通过质子泵和氯离子通道从细胞质中泵送质子穿过膜来维持这种pH差异。LysoBrite 溶酶体红色荧光探针是美国AAT Bioquest研发的产品。

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使用LysoBrite 染料的分析方案

概述

准备细胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分钟

洗涤细胞

在荧光显微镜下分析

注：该方案仅提供指南，应根据您的具体需求进行修改。

 

操作方法

1.制备溶酶体染色溶液：

1.1解冻 LysoBrite 染料至室温。

1.2通过将20μL的500 X LysoBrite 染料稀释到10 mL Hanks和20 mm Hepes缓冲液或缓冲液（HBSS）中，制备染料工作溶液。

注1：对于一个96孔板，20μL的LysoBrite 染料就足够了。 在<-15℃下等分并储存未使用的LysoBrite 染料储备溶液。 保护它免受光照，避免反复冻融循环。

注2：荧光溶酶体指示剂的浓度根据具体应用而变化。 可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件。

 

2.准备和染色细胞：

2.1贴壁细胞：a.在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养细胞。当细胞达到所需的汇合时，加入等体积的染料加工溶液（来自步骤1.2）。 b.将细胞在37℃，5％CO₂培养箱中孵育30分钟。 c.用预热（37℃）Hanks和20mM Hepes缓冲液（HBSS）或您选择的缓冲液洗涤细胞两次，用HBSS或生长培养基填充细胞孔。 d.使用配有所需滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

注意：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

2.2对于悬浮细胞：a.将等体积的染料加工溶液（来自步骤1.2）加入细胞中。将细胞在37℃，5％CO₂培养箱中孵育30分钟。 b.用预热（37℃）Hanks和20mM Hepes缓冲液（HBSS）或您选择的缓冲液洗涤细胞两次，用HBSS或生长培养基填充细胞孔。 c.使用配备有所需过滤器组的荧光显微镜观察细胞。

注1：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或培养时间以使染料积累。

注2：悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理过的盖玻片上，并作为粘附细胞染色（见步骤2.1）。

 

参考文献

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Advanced glycation end-products increase IL-6 and ICAM-1 expression via RAGE, MAPK and NF-$\kappa$B pathways in human gingival fibroblasts
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