Live or Dead 细胞活性检测试剂盒 *红/蓝双色荧光*

Live or Dead 细胞活性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的细胞活性检测试剂盒，此 Live or Dead 细胞活力检测试剂盒使用两种荧光指示剂：用于标记活细胞的 Cellbrite Red (Ex/Em = 613/631 nm) 和细胞不可渗透的 DNA 结合染料 Nuclear Blue DCS1 (Ex/Em = 360 nm) /450 nm）用于标记膜受损的死细胞。在黑色板中生长的细胞可以在不到两小时内进行染色和定量。该测定比其他活力测定更稳定、更准确。它可以轻松适应各种荧光平台，例如微孔板测定、荧光显微镜和流式细胞术。该试剂盒提供了所有必要的组件以及优化的检测方案。它适用于增殖和非增殖细胞（悬浮细胞或贴壁细胞）。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Live or Dead 细胞活性检测试剂盒。 

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荧光显微镜
Ex:	Cy5 滤波片组（活），DAPI 滤波片组（死）
Em：	Cy5 滤波片组（活），DAPI 滤波片组（死）
推荐孔板:	黑色透明底板

 

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荧光酶标仪
Ex:	610, 360 nm
Em：	650, 450 nm
Cutoff：	630, 420 nm
推荐孔板:	黑色透明底板
读取模式:	底读模式

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物制备细胞
2.添加染料加工溶液
3.在室温或37°C孵育30分钟至1小时
4.在Ex / Em = 610/650 nm（截止= 630 nm，红色）和Ex / Em = 360/450 nm（截止= 420 nm，蓝色）或在荧光显微镜下观察（Texas red/Cy5通道   活细胞），（DAPI通道  死细胞）

 

工作溶液配制

将5μL的200X Cellbrite Red（组分A）和5μL的200X Nuclear Blue DCS1（组分C）加入1mL的测定缓冲液（组分B）中并充分混合以制备染料 - 工作溶液。 该染料加工溶液在室温下稳定至少1小时。 注意：由于染色条件可能因细胞类型的不同而异，因此建议单独确定组分A和C的适当浓度。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

 

操作步骤

1.根据标准方案准备细胞。 注意：我们用星形孢菌素（SS）在37℃下处理HeLa细胞4小时以诱导细胞凋亡。 详细信息请参见图1。

2.用100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的染料加工溶液替换生长培养基。

3.将染料加工溶液板在室温或37°C孵育30分钟至1小时，避光。

4.用HHBS，PBS或您选择的缓冲液洗涤细胞两次。

5.向细胞中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的测定缓冲液（组分B）。

6.用荧光显微镜监测荧光信号，用德克萨斯红或Cy5过滤器检测活细胞，用DAPI过滤死细胞。 还可以使用荧光酶标仪（底部读取模式）在Ex / Em = 610 / 650nm（截止= 630nm，红色）和Ex / Em = 360 / 450nm（截止= 420nm，蓝色）下分析荧光强度。

 

数据分析

图1.用Live或Dead 细胞活力测定试剂盒*双荧光*（Cat＃22788）标记的HeLa细胞的荧光图像。 将100,000细胞/孔/100μL的HeLa细胞在96孔黑壁/透明底板中接种过夜。 将细胞用0-1μM星形孢菌素（SS）在37℃处理4小时（A-D），或在乙醇（E）中固定，然后与染料加载溶液一起温育1小时。 荧光信号分别使用具有德克萨斯红或Cy5过滤器的荧光显微镜测量活细胞（红色）和用于坏死细胞的DAPI过滤器（蓝色）。（F）使用FlexStation®酶标仪（Molecular Devices）测量相应的荧光信号，底部读数模式为Ex / Em = 610/650（截止= 630nm，红色），Ex / Em = 360/450（截止= 分别为420nm，蓝色）。

 

参考文献

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Cell Meter 细胞活性检测试剂盒 *绿色/红色双重荧光*	Cat#22789