钙离子荧光探针Indo1AM CAS 112926-02-0

钙测量对于许多生物学研究至关重要。与 Ca2+ 结合后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够通过使用荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离 Ca2+ 浓度的变化。这种可渗透细胞的 Indo-1 AM 是一种可紫外光激发、发射比例的 Ca2+ 指示剂。与 Ca2+ 结合后，Indo-1 AM 的发射最大值从 480 nm 变为 400 nm。 Indo-1 是流式细胞术的首选，其中使用单一激光进行激发更为实用，例如氩离子激光的 351-364 nm 谱线。

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溶解方案(溶剂以说明书为准)

实验方案

储备溶液配制

在高质量无水 DMSO 中制备 2 至 5 mM Indo-1 AM 储备溶液。

工作溶液配制

Indo-1 AM工作溶液
1.实验当天，将 Indo-1 AM 溶解在 DMSO 中或将指示剂储备溶液的等分试样解冻至室温。

2.在您选择的缓冲液（例如 Hanks 和 Hepes 缓冲液）中用 0.04% Pluronic® F-127 制备 2 至 20 µM Indo-1 AM 工作溶液。对于大多数细胞系，建议终浓度为 4-5 μM 的 Indo-1 AM。细胞加载所需指示剂的准确浓度必须根据经验确定。

注：非离子洗涤剂 Pluronic® F-127 有时用于增加 Indo-1 AM 的水溶性。可以从百萤购买各种 Pluronic® F-127 解决方案。
注：如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中（孔中的最终浓度为 0.5-1 mM），以减少脱酯后探针的泄漏。各种 ReadiUse 丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，均可从百萤购买。

操作步骤

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。本方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.在生长培养基中培养细胞过夜。
2.第二天，将 1X Indo-1 AM 工作溶液添加到细胞板中。
注意：如果您的化合物干扰血清，请在上样前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。
3.将载有染料的板在细胞培养箱中于 37°C 下孵育 30 至 60 分钟。
注：孵育染料超过 1 小时可以提高某些细胞系的信号强度。
4.用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒）代替染料工作溶液，以去除任何多余的探针。
5.根据需要添加刺激剂，并使用配备 Indo-1 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（如 FlexStation）的荧光酶标仪同时测量荧光

试剂应用文献

参考文献