iFluor 647 酪胺（iFluor 647 Tyramide）
| Ex (nm) | 656 | Em (nm) | 670 |
| 分子量 | 1092.20 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
|
产品货期： 咨询 |
|
|
适用范围： 该产品适合标记抗体或蛋白。应用于细胞或组织。 |
|
|
产品优势： 1.荧光信号更强； 2.灵敏度更高； |
|
|
产品简介： iFluor 647 酪胺（iFluor 647 Tyramide），是一种用于荧光信号放大的产品，它通过HRP和过氧化氢催化，标记到抗体上。 |
|
|
注意事项： 1. 该产品不能进行活体成像。 2. 100slides：一管试剂足够100个玻片使用。 3. 200slides大约为100ug。 |
|
| 查看光谱 | |
|
适用仪器： |
|
| 荧光显微镜 | |
| Ex: | Cy5滤波片组 |
| Em： | Cy5滤波片组 |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 滤波片： | Cy5滤波片组 |
样品实验方案
简要概述
- 修复/透化细胞或组织
- 在封闭缓冲液中添加一抗
- 加入HRP标记的二抗
- 准备酪胺工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）
溶液配制
储备溶液配制
酪胺储备溶液（200X）
将100 µL DMSO加入小瓶中并充分混合。
注意：未使用的酪胺储备溶液可在2-8℃下储存。
工作溶液配制
酪胺工作溶液（1X）
将100 µL酪胺储备溶液添加到20 mL含有0.003％H2O2的缓冲液中。
注意：1.使用pH = 7.4的Tris Buffer更好。
2.应立即使用Tyramide工作溶液，随用随配。
3.20 mL溶液适合200次测试。
实验步骤
（该步骤适用于细胞或组织染色）
细胞固定和透化
1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。
2.用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。
4.用PBS冲洗细胞或组织两次。
组织固定，脱石蜡和补液
（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）
过氧化物酶标记
1.可选：在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟，淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。
2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。
3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。
4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。
5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。
6.将100 µL二抗-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。
注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。
7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。
酪胺标记
1.准备并向每个样品中加入100 µL的Tyramide工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。
注意：如果观察到非特异性信号，则可以缩短与Tyramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育时间。或者在工作溶液中使用较低浓度的酪胺。
2.用PBS冲洗3次。
复染和荧光成像
1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂说明进行操作。
2.加上盖玻片。
3.使用适当的滤波器观察Tyramide的荧光信号。
表1.建议用于核复染色的产品。
| 货号 | 产品名称 | Ex/Em(nm) |
| 17548 | 核蓝 DCS1 | 350/461 |
| 17550 | 核绿 DCS1 | 503/526 |
| 17551 | 核橙 DCS1 | 528/576 |
| 17552 | 核红 DCS1 | 642/660 |
试剂应用文献
Authors: Dai, Zan and Wang, Qiaoyun and Tang, Jie and Wu, Min and Li, Haoze and Yang, Yannan and Zhen, Xu and Yu, Chengzhong
Journal: Biomaterials (2022): 121261
Authors: Mohale, Mamello and Gundampati, Ravi Kumar and Kumar, Thallapuranam Krishnaswamy Suresh and Heyes, Colin D
Journal: Analytical biochemistry (2022): 114524
Authors: Ji, Tengfei and Ma, Keqiang and Wu, Hongsheng and Cao, Tiansheng
Journal: (2021)
Authors: Gerlach, Brennan D and Ampomah, Patrick B and Yurdagul Jr, Arif and Liu, Chuang and Lauring, Max C and Wang, Xiaobo and Kasikara, Canan and Kong, Na and Shi, Jinjun and Tao, Wei and others,
Journal: Cell metabolism (2021): 2445--2463
Authors: Ilnytska, Olga and Lai, Kimberly and Gorshkov, Kirill and Schultz, Mark L and Tran, Bruce Nguyen and Jeziorek, Maciej and Kunkel, Thaddeus J and Azaria, Ruth D and McLoughlin, Hayley S and Waghalter, Miriam and others,
Journal: Journal of Biological Chemistry (2021)
Authors: Masibag, Angelique N and Bergin, Christopher J and Haebe, Joshua R and Zouggar, A{\"\i}cha and Shah, Muhammad S and Sandouka, Tamara and da Silva, Amanda Mendes and Desrochers, Fran{\c{c}}ois M and Fournier-Morin, Aube and Benoit, Yannick D
Journal: Iscience (2021): 103442
Authors: Li, Dong and Zhuang, Jie and He, Haisheng and Jiang, Sifan and Banerjee, Amrita and Lu, Yi and Wu, Wei and Mitragotri, Samir and Gan, Li and Qi, Jianping
Journal: ACS applied materials \& interfaces (2017): 42492--42502
