iFluor 405 叠氮化物
| Ex (nm) | 403 | Em (nm) | 427 |
| 分子量 | 660.64 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
产品货期
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产品优势
1.高水溶性： 可以不用有机溶剂进行偶联，在储存期间不易沉淀；
2.出色的光稳定性：好的光稳定性可以实现更长时间的图像捕捉；
3.荧光亮度强：比其他光谱相似偶联物（例如 Alexa Fluor® 染料、荧光素染料、花菁染料等）的荧光更强；
4.pH值不敏感：在广泛的pH范围内具有很高的荧光强度；
适用范围
主要用于标记蛋白或抗体
产品介绍
AAT Bioquest生产的 iFluor 405叠氮化物与炔烃反应，对标记蛋白质（尤其是抗体）进行了优化。这些染料明亮、光稳定，并且对蛋白质的猝灭作用小。 iFluor 405 系列的光谱特性与 Cy3® 基本相同（Cy3® 是 GE Healthcare 的商标）。与 Cy3® 探针相比，iFluor® 405 试剂具有更强的荧光和更高的光稳定性。
操作方案
标记寡核苷酸
1.准备以下试剂：
200mMTHPTA [tris（3-羟丙基三唑基甲基）胺]水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烃修饰的低聚水溶液（尽可能浓缩，> 10 mg / mL）
100 mM抗坏血酸钠水溶液
10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）
2.在反应前将CuSO4与THPTA以1：2的比例混合并充分涡旋几分钟。该溶液在冷冻时可稳定数周。
3.向炔烃改性的低聚物溶液中加入过量的染料叠氮化物（摩尔比为2-5当量）。
4.加入5当量的THPTA / CuSO4工作溶液（来自步骤1）。
5.加入10-30当量的抗坏血酸钠。
6.在室温下搅拌，涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。
7.乙醇通过所需方法（例如HPLC）沉淀或纯化寡聚物。
标记肽
1.准备以下试剂：
200 mM THPTA配体水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烃修饰肽水溶液或DMF溶液（取决于您的肽溶解度，> 10 mg / mL）
100 mM抗坏血酸钠水溶液
10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）
2.在反应前几分钟以1：2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。 该溶液在冷冻时可稳定数周。
3.向炔烃修饰的肽溶液中加入过量的染料叠氮化物（摩尔比为5-10当量）。
4.加入5-10当量的THPTA / CuSO4。
5.加入10-20当量的抗坏血酸钠。
6.在室温下搅拌，涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。
7.通过HPLC纯化您想要的肽。
标记炔烃有机小分子
1.准备以下试剂：
200 mM THPTA配体水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烃化合物水溶液或DMF溶液（取决于您的化合物溶解度，> 10mg / mL，）
100 mM抗坏血酸钠水溶液
10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）。
2.在反应前几分钟以1：2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。当冷冻时，该溶液可稳定数周。
3.向炔烃溶液中加入过量的染料叠氮化物（摩尔比为5-10当量）。
4.加入25当量的THPTA / CuSO4。
5.加入50当量的抗坏血酸钠。
6.在室温下搅拌反应混合物30-60分钟。
7.通过色谱或其他方法纯化您想要的分子。
标记生物聚合物
1.准备以下试剂：
200 mM THPTA配体水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烃改性的水中生物聚合物（尽可能浓缩，> 5毫克/毫升）
100 mM抗坏血酸钠水溶液
10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（有关推荐的溶剂，请参阅我们的网站）。
2.在反应前几分钟以1：2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。 该溶液在冷冻时可稳定数周。
3.向炔烃改性的生物聚合物溶液中加入过量的染料叠氮化物（负载比：5-20染料叠氮化物/炔烃）。
4.加入5摩尔当量（参考染料叠氮化物）的THPTA / CuSO4。
5.加入10当量的抗坏血酸钠（参见染料叠氮化物）。
6.在室温下搅拌，涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。
7.通过凝胶过滤或透析纯化您想要的分子。
标记细胞，细胞裂解物或生物样品
1.准备以下试剂：
水性缓冲液或100mM THPTA配体水溶液
20mM CuSO4水溶液
300mM抗坏血酸钠水溶液
2.5mM炔烃或叠氮化物标记试剂水溶液或DMSO溶液
2.对于每个叠氮化物或炔烃修饰的细胞或细胞裂解物样品，将以下试剂加入1.5 mL微量离心管中，然后短暂涡旋混合。
50μL细胞或细胞裂解液样品
50μLPBS缓冲液
50μL5mM相应的染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液（或染料炔烃）检测试剂
3.加入10μL100mM THPTA溶液，短暂涡旋混合。
4.加入10μL20mM CuSO4溶液，短暂涡旋振荡。
5.加入10μL300mM抗坏血酸钠溶液以引发点击反应，短暂涡旋混合。
6.保护点击反应不受光照，使其在室温下孵育30分钟。
7.点击标记细胞或细胞裂解物并准备用于下游处理和/或分析。
