荧光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK
| Ex (nm) | 491 | Em (nm) | 516 |
| 分子量 | 1037.07 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
荧光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK是美国AAT Bioquest生产的荧光底物，半胱天冬酶的在细胞凋亡中起重要作用。 FITC-C6-D（OMe）E（OMe）VD（OMe）-FMK为活细胞中活化的胱天蛋白酶-3的灵敏检测提供了方便的手段。 FITC-C6-D（OMe）E（OMe）VD（OMe）-FMK是细胞可渗透的，的，并且在凋亡细胞中不可逆地结合活化的胱天蛋白酶-3。 基于我们的内部研究，与我们测试的其他DEVD-FMK探针相比，FITC-C6-D（OMe）E（OMe）VD（OMe）-FMK具有高的信号/背景比。 FITC标签允许通过荧光显微镜，流式细胞术或荧光板读数器直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的荧光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK。
样品实验方案
以下说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。
1.使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的一般溶液Caspase测定
1.1在DMSO中制备10mM储备溶液。
1.2制备2X半胱天冬酶底物（50μM）测定溶液，如下所示：
50 L基质原液
100L DTT（1M）
400L EDTA（100 mM）
10mL Tris缓冲液（20mM），pH = 7.4
1.3将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤1.2）混合，并在室温下孵育溶液至少1小时。
1.4使用荧光酶标仪检测荧光，或使用吸光度酶标仪检测吸光度。
2.细胞Caspase检测使用细胞渗透FMK半胱天冬酶探针
2.1在DMSO中制备2-5mM储备溶液。
2.2根据需要对细胞进行处理。
2.3通过用20mM Hepes缓冲液（HHBS）稀释Hanks中的DMSO储备溶液（来自步骤2.1），制备2X可渗透的半胱天冬酶底物（20μM）测定溶液。
2.4用2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤2.3）混合等体积的处理细胞，并将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育至少1小时。
2.5用HHBS洗涤细胞至少一次。
2.6用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。
3.细胞Caspase检测使用细胞渗透性FMK Caspase探针（仅适用于＃13470-13476）
3.1通过向小瓶中加入50μLDMSO制备250X储备溶液。
3.2根据需要对细胞进行处理。
3.3将250 X DMSO储备溶液（来自步骤3.1）以1：250的比例（例如2 uL至500 uL细胞）添加到细胞溶液中，并将细胞在37°C，5％CO 2培养箱中孵育1 小时。
3.4用HHBS洗涤细胞至少一次。
3.5用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。
参考文献
Activation of caspase-like activity and poly (ADP-ribose) polymerase degradation during sporulation in Aspergillus nidulans
Authors: Thrane C, Kaufmann U, Stummann BM, Olsson S.
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[Antitumor mechanism of 3-bromopropionylamino benzoylurea on leukemia and lymphoma]
Authors: Li JN, Song DQ, Jiang JD.
Journal: Yao Xue Xue Bao (2004): 491
Caspase-dependent and independent cell death in rat hepatoma 5123tc cells
Authors: Pandey S, Smith B, Walker PR, Sikorska M.
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C-myc antisense oligodeoxynucleotides can induce apoptosis and down-regulate Fas expression in rheumatoid synoviocytes
Authors: Hashiramoto A, Sano H, Maekawa T, Kawahito Y, Kimura S, Kusaka Y, Wilder RL, Kato H, Kondo M, Nakajima H.
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