荧光底物FAM-LETD-FMK

荧光底物FAM-LETD-FMK是美国AAT Bioquest生产的荧光底物，caspase 的在细胞凋亡中起着核心作用。 FAM-LETD-FMK 为灵敏检测活细胞中活化的 caspase-8 提供了一种方便的方法。 它是细胞可渗透的、的，并且不可逆地与凋亡细胞中的 caspase-8 结合。 FAM 标签允许通过荧光显微镜、流式细胞术或荧光读板器直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的荧光底物FAM-LETD-FMK。

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样品实验方案

以下说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的一般溶液Caspase测定

1.1在DMSO中制备10mM储备溶液。

1.2制备2X半胱天冬酶底物（50μM）测定溶液，如下所示：

50 L基质原液

100L DTT（1M）

400L EDTA（100 mM）

10mL Tris缓冲液（20mM），pH = 7.4

1.3将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤1.2）混合，并在室温下孵育溶液至少1小时。

1.4使用荧光酶标仪检测荧光，或使用吸光度酶标仪检测吸光度。

 

2.细胞Caspase检测使用细胞渗透FMK半胱天冬酶探针

2.1在DMSO中制备2-5mM储备溶液。

2.2根据需要对细胞进行处理。

2.3通过用20mM Hepes缓冲液（HHBS）稀释Hanks中的DMSO储备溶液（来自步骤2.1），制备2X可渗透的半胱天冬酶底物（20μM）测定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤2.3）混合等体积的处理细胞，并将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育至少1小时。

2.5用HHBS洗涤细胞至少一次。

2.6用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

3.细胞Caspase检测使用细胞渗透性FMK Caspase探针（仅适用于＃13470-13476）

3.1通过向小瓶中加入50μLDMSO制备250X储备溶液。

3.2根据需要对细胞进行处理。

3.3将250 X DMSO储备溶液（来自步骤3.1）以1：250的比例（例如2 uL至500 uL细胞）添加到细胞溶液中，并将细胞在37°C，5％CO 2培养箱中孵育1 小时。

3.4用HHBS洗涤细胞至少一次。

3.5用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

参考文献

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Authors: Thrane C, Kaufmann U, Stummann BM, Olsson S.
Journal: Fungal Genet Biol (2004): 361

[Antitumor mechanism of 3-bromopropionylamino benzoylurea on leukemia and lymphoma]
Authors: Li JN, Song DQ, Jiang JD.
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Caspase-dependent and independent cell death in rat hepatoma 5123tc cells
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C-myc antisense oligodeoxynucleotides can induce apoptosis and down-regulate Fas expression in rheumatoid synoviocytes
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