Cyber Green核酸凝胶染料

Cyber Green 染料是一种绿色荧光核酸染料，可用于qPCR，解链曲线分析，嗜热解旋酶依赖性扩增（tHDA）的实时监测，常规溶液DNA定量和各种凝胶电泳。 DNA结合的Cyber Green 染料的激发和发射光谱非常接近荧光素（FAM）或SYBR®Green，使染料与配备488 nm氩激光的仪器或任何波长区域的可见光激发兼容。 Cyber Green 染料在热和水解方面都非常稳定，在日常处理过程中提供了便利。染料本身基本上是非荧光的，但在与dsDNA结合后变得高度荧光。荧光强度至少比溴化乙锭高一个数量级。此外，DNA / Cyber Green 复合物的荧光量子产率比DNA /溴化乙锭的荧光量子产率高5倍以上。它可以在电泳（预染色）之前，以及在电泳（后染色）之后使用，并且通过毛细管电泳分离染色DNA。它也常用于分子生物学，不含酶（例如：Taq酶，逆转录酶，内切核酸酶，T4连接酶）抑制，并且不干扰Southern blot(Southern印迹杂交)。

染料特点

高灵敏： 至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍

信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低

操作简单：无须脱色或冲洗

适用范围广：可适用于多种电泳分析

使用方便：不影响其它修饰酶作用

经济：价格便宜

染色方案

我们发现通过后染色实现了最大的灵敏度，这也消除了染料干扰DNA迁移的可能性。虽然预制方案更方便，但一些DNA样本可能会出现迁移，强烈建议凝胶运行时间不超过2小时。建议使用以下方案。 可能需要进行一些比较以确定哪一个更符合您的需求。

1.后染色方案

1.1根据您的标准方案运行凝胶。

1.2通过将10,000X储备试剂稀释到PH 7.5  -  8缓冲液中制备1X Cyber Green 工作溶液（例如，TAE，TBE或TE优选pH8.0）。

注意：在水中制备的染色溶液不如在缓冲液中制备的染色溶液稳定，必须在24小时内使用，以确保最大的染色灵敏度。另外，在pH低于约7.5或高于8.0的缓冲液中制备的染色溶液不太稳定并且显示出降低的染色效力。

1.3将凝胶放入合适的聚丙烯容器中。轻轻加入足量的1X染色溶液浸没凝胶。

注意：不要使用玻璃容器，因为它会吸附染色溶液中的大部分染料。

1.4在室温下轻轻搅拌凝胶约30分钟，避光。

注意：染色溶液可以在黑暗中储存（最好是冷藏）一周，最多重复使用2-3次。

1.5使用254 nm透射仪或使用长路绿色滤光片（如SYBR®滤光片或GelStar®滤光片）的激光凝胶扫描仪对染色的凝胶成像。

2.预染色方案

2.1使用标准方案制备琼脂糖凝胶溶液。

2.2在浇注凝胶前将10,000X Cyber Green™原液试剂以1：10,000稀释到凝胶溶液中并充分混合。

2.3根据您的标准方案运行凝胶。

2.4使用254 nm透射仪或使用长路径绿色滤光片（如SYBR®滤光片或GelStar®滤光片）的激光凝胶扫描仪对染色的凝胶成像。

3.电泳前的DNA染色

3.1在电泳前，用1：10,000稀释的染料（TE，TBE或TAE）孵育DNA至少15分钟。

3.2根据您的标准方案运行凝胶。

3.3使用254 nm透射仪或使用长路绿色滤光片（如SYBR®滤光片或GelStar®滤光片）的激光凝胶扫描仪对染色的凝胶成像。