Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具，可以使用多种参数。该特定试剂盒旨在同时检测凋亡，坏死和健康细胞。细胞凋亡是一种主动的程序化的细胞自发解体过程，可避免引起炎症。在凋亡中，磷脂酰丝氨酸（PS）被转移到质膜的外部小叶。作为细胞凋亡初始/中间阶段的通用指标，在观察形态变化之前，可以检测到磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现。 PS指示剂Annexin V-iFluor 488共轭物与膜PS结合后具有绿色荧光。膜不透性的Nuclear Blue DCS1（Ex / Em = 350/461 nm）标记细胞核的能力证明，质膜完整性的丧失代表了显示凋亡和坏死晚期的直接方法。此外，该试剂盒还提供了活细胞标记染料Cellbrite Red（Ex / Em = 613/631 nm），用于标记非凋亡健康细胞。该试剂盒经过优化，可通过荧光显微镜同时检测细胞凋亡（绿色），坏死（蓝色和/或绿色）和健康细胞（红色）。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 494 nm（细胞凋亡）/350 nm（坏死）/613 nm（活） |
| Em： | 520 nm（细胞凋亡）/461 nm（坏死）/631 nm（活） |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 滤波片: | FITC滤波片 (凋亡) / DAPI滤波片(坏死) / Cy5滤波片 (活) |
样品实验方案
简要概述
- 用测试化合物准备细胞
- 加入三重荧光工作溶液（100 µL /样品）
- 在室温或37℃下孵育30-60分钟
- 用荧光显微镜在FITC通道（凋亡），DAPI通道（坏死）或Texas Red / Cy5通道（健康细胞）处进行分析
溶液配制
工作溶液配制
将10 µL的100X Annexin V-iFluor 488偶联物（组分A），5 µL的200X Nuclear Blue DCS1（组分C）和5 µL的200X Cellbrite Red（组分D）添加到1 mL的测定缓冲液（组分B）中 ）。 三重荧光测定溶液在室温下稳定至少1小时。 注意：由于染色条件可能会因细胞类型而异，因此建议分别确定组分A，C和D的适当浓度。
实验步骤
1.处理后除去细胞培养基并检测化合物。
2.加入100 µL /孔（96孔板）或50 µL /孔（384孔板）的三重荧光分析溶液。 在避光条件下，于37℃孵育30至60分钟。
3.用HBSS，PBS或自备缓冲液洗涤细胞两次。
4.在带有FITC滤光片的荧光显微镜下，用Annexin V-iFluor 488偶联物分析凋亡细胞。 质膜上的绿色染色（Ex / Em = 494/520 nm）表明膜联蛋白V-iFluor 488缀合物与细胞表面的PS结合。 使用荧光显微镜用DAPI滤光片（Ex / Em = 350/461 nm）检测坏死的荧光强度，使用Texas Red或Cy5滤光片（Ex / Em = 613/631 nm）检测活细胞的荧光强度。
参考文献
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