Cell Meter 活细胞胱天蛋白酶3/7成像试剂盒*绿色荧光*
| Ex (nm) | 500 | Em (nm) | 522 |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
产品货期
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产品优势
1.无需DNA结合即可发光（区别于NucView试剂）
2.不会抑制caspase活性（区别于FMK肽类探针）
3.免洗设计，适合自动化操作
适用范围
用于活细胞免洗Caspase 3/7检测
产品介绍
Cell Meter™活细胞免洗Caspase 3/7荧光成像试剂盒采用新型细胞膜通透性荧光底物——ApoSight™ Green Caspase 3/7，这是首款可直接检测活细胞中caspase活性的荧光探针。该底物由三部分组成：1）掩蔽荧光基团；2）caspase特异性识别肽段（DEVD）；3）细胞穿透模块。穿透模块将探针导入活细胞后，caspase酶会切割肽段释放荧光基团，其荧光强度（激发/发射波长~490/520 nm）与caspase活性直接相关。
相比现有活细胞caspase检测技术，ApoSight™ Green Caspase 3/7具有显著优势：无需DNA结合即可发光（区别于NucView试剂），且不会抑制caspase活性（区别于FMK肽类探针）。传统FMK探针存在严重缺陷：1）共价结合caspase导致高细胞毒性；2）不可逆抑制酶活性引发假阳性凋亡信号；3）高背景需频繁洗涤，通量极低；4）水溶液中不稳定需现配现用。
Cell Meter 活细胞胱天蛋白酶3/7成像试剂盒提供优化的荧光检测方案，可精准监测caspase 3/7活性，支持96孔板或384孔板的高通量检测，并兼容自动化系统。其免洗设计、低毒性和高稳定性，使其成为细胞凋亡研究的理想工具。
适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| Ex: | FITC 滤波片组 |
| Em： | FITC 滤波片组 |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
样品实验方案
简要概述
1.使用96孔板的密度为5×104至2×105细胞/ 100 µL /孔的待测化合物制备细胞
2.加入等体积的ApoSight Caspase 3/7底物工作溶液
3.在5％CO2培养箱中于37°C孵育60分钟
4.用HHBS洗涤细胞1-2次
5.使用带有530/30 nm滤波片（FITC通道）的流式细胞仪或带有FITC滤波片组的荧光显微镜分析细胞
溶液配制
储备溶液配制
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免反复冻融。
在ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物瓶中加入50 µL DMSO，制成200X ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物原液。
注意，一次性使用等分试样，避免反复冻融。
注意，100 µL ApoSight Green Caspase 3/7底物工作溶液足以进行96孔板的10次检测
注意，实验前准备足够的ApoSight Green Caspase 3/7底物工作溶液，并立即使用。
样品示例及操作
悬浮培养中诱导细胞凋亡的实例
1.用2μg/ mL喜树碱处理Jurkat细胞3小时
2.用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3-4小时
3.用4μg/ mL喜树碱处理HL-60细胞4小时
4.用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。
注意，应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导凋亡的细胞密度。
荧光显微镜的样品方案
1.用5×104至2×105个细胞/ 100 µL /孔/ 96孔板的密度制备含待测化合物的细胞。
2.向细胞中加入等体积的Caspase 3/7底物工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板）。
3.在5％CO2培养箱中于37°C孵育60分钟。
4.用HHBS或您选择的缓冲液洗涤细胞1-2次。
5.使用FITC滤波片组的荧光显微镜成像。
