Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 绿色荧光
| Ex (nm) | 493 | Em (nm) | 517 |
| 分子量 | - | 溶剂 | Water |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
我们的Cell Meter 活细胞半胱天冬酶活性检测试剂盒基于半胱天冬酶的荧光抑制剂。这些抑制剂具有细胞渗透性和非细胞毒性。一旦进入细胞，半胱天冬酶抑与活性半胱天冬酶共价结合。胱天蛋白酶3/7的激活对于细胞凋亡的起始是重要的。已经证明胱天蛋白酶3/7对肽序列Asp-Glu-Val-Asp（DEVD）具有底物选择性。该试剂盒使用TF3-DEVD-FMK作为半胱天冬酶3/7活性的荧光指示剂。TF3-DEVD-FMK在凋亡细胞中不可逆地结合活化的胱天蛋白酶3/7。一旦与胱天蛋白酶3/7结合，荧光试剂保留在细胞内。结合抑制caspase 3/7，但不会阻止细胞凋亡的进行。
有多种参数可用于检测细胞凋亡。这种Cell Meter 活细胞半胱天冬酶3/7活性测定试剂盒旨在通过测量活细胞中胱天蛋白酶3/7的活化来检测细胞凋亡。它用于定量凋亡细胞中活化的caspase 3/7活性，或用于筛选caspase 3/7抑制剂。TF3-DEVD-FMK，红色标记试剂，允许通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶3/7。该试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。
适用仪器
| 流式细胞仪 | |
| 参数 | 见表1 |
| 荧光显微镜 | |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
| 通道： | 见表1 |
| 荧光酶标仪 | |
| 推荐孔板： | 黑色孔板 |
| 通道： | 见表2 |
表1:用于流式细胞仪和荧光显微镜的荧光强度检测
| 流式细胞仪 | 荧光显微镜 | |
| FAM-DEVD-FMK | FL1 通道 | FITC 通道 |
| Propidium Iodide | FL2 通道 | TRITC 通道 |
| Hoechst Dye | 紫色激光 | DAPI 通道 |
表2:荧光酶标仪的荧光强度检测
| 激发 | 发射 | cutoff | |
| FAM-DEVD-FMK | FL1 通道 | FITC 通道 | 515nm |
| Propidium Iodide | FL2 通道 | TRITC 通道 | |
| Hoechst Dye | 紫色激光 | DAPI 通道 |
分离细胞的检测方案
概述
用测试化合物制备细胞，密度为5×105至2×106个细胞/ mL
将TF3-DEVD-FMK以1：150的比例加入细胞溶液中
在室温下孵育1小时
沉淀细胞，用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞
在Ex / Em = 550 / 595nm处分析细胞
注：使用前将所有部件在室温下解冻。
原液配制
FAM-DEVD-FMK DMSO原液 (150X)：将 50 µL DMSO 添加到 FAM-DEVD-FMK（组分 A）小瓶中。有关细胞样品制备的指南，请访问 https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html。
操作方法
1.根据您的特异性诱导方案，将细胞培养至适于细胞凋亡诱导的密度，但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时，对于每种标记条件，以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子：
1）用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。
2）用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。
3）用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。
4）用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。
注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的细胞密度。
2.通过向TF3-DEVD-FMK（组分A）的小瓶中加入50μLDMSO制备150X TF3-DEVD-FMK DMSO储备溶液。 将150×TF3-DEVD-FMK以1：150的比例加入细胞溶液中，并将细胞在37℃，5％CO2培养箱中孵育1小时。
注1：对于TF3-DEVD-FMK标记，细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。 未使用的150X TF3-DEVD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。
注2：对于粘附细胞，用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用TF3-DEVD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。
注3：适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。
3.将细胞以约200g旋转5分钟，并用1mL洗涤缓冲液（组分B）洗涤细胞两次。 将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。
注1：TF3-DEVD-FMK是荧光的，因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。
注2：对于分离的细胞，应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样，用于步骤5。
4.如果需要，用DNA染色标记细胞（例如用于死细胞的Nuclear Green DCS1，或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst）。
5.根据表 1 或表 2，通过荧光显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪监测荧光强度。对于荧光显微镜和荧光酶标仪，将 100 µL 细胞悬浮液放入 96 孔黑色微量滴定板的每个孔中。注意：对于分离的细胞，细胞浓度应调整为每微量滴定板孔 2 - 5 X 105 个细胞/100 µL 等份。
参考文献
An inner activation gate controls TMEM16F phospholipid scrambling
Authors: Trieu Le, Zhiguang Jia, Son C Le, Yang Zhang, Jianhan Chen, Huanghe Yang
Journal: Nature communications (2019): 1846
Drosophila Subdued is a moonlighting transmembrane protein 16 (TMEM16) that transports ions and phospholipids
Authors: Trieu Le, Son C Le, Huanghe Yang
Journal: Journal of Biological Chemistry (2019): jbc--AC118
Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent Pathways
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58
Death receptor 3 mediates necroptotic cell death
Authors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1--12
Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cells
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: PloS one (2015): e0124407
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| 产品名称 | 货号 |
| Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 红色荧光 | Cat#20101 |
