Cell Meter 活细胞ATP检测试剂盒

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适用范围

用于活细胞ATP检测

产品介绍

三磷酸腺苷（ATP）在细胞能量代谢、代谢调控和细胞信号传导中发挥核心作用，被誉为细胞内能量转移的"分子货币"，驱动多种生物过程和化学合成。ATP同时作为细胞间通讯的信号分子，并在DNA/RNA合成中起关键作用，其主要定位于发生细胞呼吸作用的线粒体中。ATP水平可作为细胞增殖和细胞周期动态的监测指标。

AAT Bioquest提供多种生物发光、荧光及比色法检测试剂盒用于溶液ATP定量。其中Cell Meter™活细胞ATP检测试剂盒采用ATP Red™——一种细胞膜通透性红色荧光探针，可实现活细胞线粒体ATP浓度的实时监测。该探针具有高度特异性，与AMP、ADP、CMP、CDP、CTP、UMP、UDP、UTP、GMP、GDP及GTP等核苷酸的交叉反应性低

实验方案

概述

在生长培养基中准备细胞
将细胞与ATP Red 工作溶液在37°C下孵育15-30分钟
去掉ATP Red 工作溶液
使用荧光显微镜Cy3 / TRITC滤波片组进行检测

准备细胞

贴壁细胞
在96孔板的生长培养基中以10,000至40,000个细胞/孔/ 90μL平板培养细胞过夜，

384孔板则以2,500至10,000个细胞/孔/ 20μL平板培养过夜。

悬浮细胞
离心培养液中的细胞，然后将细胞沉淀以50,000-100,000细胞/孔/ 90 µL的浓度悬浮于96孔聚D赖氨酸平板中，或10,000-25,000细胞/孔/ 20 / L以获得384孔中的悬浮液 聚-D赖氨酸板。 实验前，将板以800 rpm的速度离心2分钟。
注意：应该对每个细胞系进行单独评估，以确定合适的细胞密度。

溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。

ATP Red 储备溶液配制（200X）

向ATP Red™（组分A）瓶中加入50 µL DMSO（组分C），配制成200X储备液。

注意：50 µL的200X ATP Red 储备溶液科满足一块96孔板。 剩余储备液需避光分装保存于≤-20°

ATP Red 工作溶液配制
将5 µL 200X储备溶液（组分A）添加到1 mL细胞培养基中，并充分混合。
注意：ATP Red 探针与我们检测的大多数细胞系的细胞培养基兼容。 可以根据特定的细胞类型修改染色条件。

操作步骤

1.在生长培养基中准备细胞。

2.在细胞板中加入等体积的ATP Red™工作溶液 [96孔板：100 µL/孔或384孔板：25 µL/孔]。

注意：ATP Red 的佳浓度因具体应用而异。

3.将细胞在37°C避光孵育15-30分钟。

4.从每个孔中除去工作溶液。 用测定缓冲液（组分B）或您选择的缓冲液洗涤细胞两次。

5.使用荧光显微镜Cy3 / TRITC滤光片组观察细胞中的荧光信号。

试剂应用文献