Cell Meter 胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒

Cell Meter 胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测NADH/NADPH的试剂盒，细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于疾病诊断和发现是重要的。通常，氧化还原偶联NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代谢，糖酵解，三羧酸循环和线粒体呼吸中起关键作用。细胞中NAD（P）H水平的增加与活性氧（ROS）和DNA损伤的异常产生有关。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探针，在生物系统中检测细胞内NAD（P）H具有挑战性。 Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NAD（P）H水平的有效方法。 JZL1707 NAD（P）H传感器是一种的荧光探针，用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。探针结合NADH / NADPH以产生具有高灵敏度和特异性的强荧光信号。 JZL1707 NAD（P）H传感器可以很容易地加载到活细胞中，并且可以使用PE通道中的流式细胞仪方便地监测其荧光信号。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒。 

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实验示例

概述

1.准备细胞（0.5-1×10⁶细胞/ mL）
2.将细胞与测试化合物和JZL1707 NAD（P）H传感器在37ºC下孵育30-60分钟
3.洗涤细胞并将其保存在测定缓冲液中
4.使用PE通道通过流式细胞仪分析细胞

操作步骤

1.对于每个样品，在0.5 mL无血清培养基或您选择的缓冲液中以1×10⁵至1×10⁶细胞/ mL的密度制备细胞。注意：应单独评估每个细胞系，以确定佳细胞密度。对于粘附细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并用无血清培养基洗涤细胞一次。注意：JZL1707 NAD（P）H传感器对血清敏感，因此建议将细胞保存在您选择的无血清培养基或缓冲液中。或者，可以制备细胞并在常规完全培养基中处理。与JZL1707 NAD（P）H Sensor孵育时，请更改为无血清培养基或您选择的缓冲液。
在37ºC下将细胞与测试化合物一起孵育所需的时间，以刺激细胞内的NADH / NADPH。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。

2.将1 µL JZL1707 NAD（P）H传感器（组分A）加入0.5 mL细胞悬液中。在37ºC下孵育30-60分钟。注意：对于NADH / NADPH阳性对照处理：将Jurkat细胞与100 µM NADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，然后与JZL1707 NAD（P）H Sensor工作溶液在37ºC共同孵育30分钟。分钟。有关详细信息，请参见图1。

3.用所需的缓冲液洗涤细胞一次。将细胞保存在测定缓冲液（组分B）中。

4.使用流式细胞仪监测PE通道的荧光强度。

参考文献

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参考文献