Cell Meter FITC-Annexin V细胞凋亡检测试剂盒 适合于流式细胞仪

Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光是美国AAT Bioquest研发的用于细胞凋亡和坏死检测的试剂盒，该特定试剂盒旨在同时监测细胞凋亡，坏死和健康。细胞凋亡是一种自主细胞拆解的活跃程序化过程，可避免引发炎症。在细胞凋亡中，磷脂酰丝氨酸（PS）被转移到质膜的外部小叶。作为细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指标，可以在观察到形态变化之前检测细胞表面上磷脂酰丝氨酸的出现。该试剂盒中使用的PS传感器在与膜PS结合后具有绿色荧光（Ex / Em = 490 / 525nm）。坏死已被描述为由于环境扰动导致的被动，意外细胞死亡，其中炎性细胞内容物不受控制地释放。如通过膜不可渗透的7-AAD（Ex / Em = 546 / 647nm）标记细胞核的能力所证明的，质膜完整性的丧失代表了证明晚期细胞凋亡和坏死的直接方法。此外，该试剂盒还提供活细胞质标记染料，CytoCalcein Violet 450（Ex / Em = 405/450 nm），用于标记活细胞的细胞质。该试剂盒经过优化，可用流式细胞仪或荧光显微镜同时检测细胞凋亡（绿色），坏死（绿色和/或红色）和健康细胞（蓝色）。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的细胞凋亡和坏死检测试剂盒。

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样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物（200μL/样品）制备细胞
2.添加膜联蛋白V-FITC测定溶液
3.在室温下孵育30-60分钟
4.使用FL1通道（Ex / Em = 490/525 nm）用流式细胞仪分析细胞

操作步骤

1.用测试化合物处理细胞一段所需的时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。注意：膜粘附细胞的膜联蛋白V流式细胞术分析未经常检测，因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。然而，Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。

2.离心细胞，得到2 - 5×10⁵个细胞/管。

3.将细胞重悬于200μL测定缓冲液（组分B）中。

4.将2μL膜联蛋白V-FITC（组分A）加入细胞中。

5.可选：加入2μL100X碘化丙啶（成分C）用于坏死细胞。

6.在室温下孵育30至60分钟，避光。

7.可选：在使用流式细胞仪分析细胞之前，添加200至300μL的测定缓冲液（组分B）以增加体积。

8.使用具有FL1通道的流式细胞仪（Ex / Em = 490 / 525nm）监测膜联蛋白V-FITC的荧光强度。当碘化丙啶加入细胞时，使用FL2通道测量细胞活力。

数据分析

        在活的非凋亡细胞中，膜联蛋白V-FITC检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡，其通常为所有细胞的2-6％。 在凋亡细胞中，膜联蛋白V-FITC与磷脂酰丝氨酸结合，磷脂酰丝氨酸位于细胞膜的外部小叶上，因此导致染色强度增加。

参考文献

Combined Treatments of Magnetic Intra-Lysosomal Hyperthermia with Doxorubicin Promotes Synergistic Anti-Tumoral Activity.
Authors: D Hajj Diab El, P Clerc, N Serhan, D Fourmy, V Gigoux
Journal: Nanomaterials (Basel, Switzerland) (2018)

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