Cell Meter 细胞活性检测试剂盒 红色荧光
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
我们的Cell Meter™检测试剂盒是一套用于监测细胞生存力的工具。有多种参数可用于监测细胞活力。该试剂盒使用专有的非荧光染料，进入活细胞后可增强红色荧光。该染料是疏水性化合物，易于渗透完整的活细胞。细胞内酯酶对非荧光底物的水解产生了强烈荧光的亲水产物，该产物被很好地保留在细胞质中。酯酶活性与活细胞的数量成正比，因此与由酯酶催化的荧光底物水解产生的产物的荧光强度直接相关。黑色壁板中生长的细胞可以在不到两个小时的时间内进行染色和定量。该测定比基于四唑鎓盐或基于Alarmar Blue™的测定更稳定。它可以很容易地适用于各种荧光平台中的高通量检测，例如微孔板检测，免疫细胞化学和流式细胞仪。它可用于多种研究，包括细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞生存力，细胞凋亡和细胞毒性。该套件为所有基本组件提供了优化的细胞标记方案。它适用于增殖和非增殖细胞，可用于悬浮细胞和贴壁细胞。荧光指示剂具有与Cy3 / TRITC滤光片组兼容的光谱特性。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 540 nm |
| Em： | 590 nm |
| Cutoff： | 570 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式: | 底读模式 |
简要概述
- 用测试化合物进行细胞准备工作
- 去掉培养基
- 加入CytoCalcein™Red AM工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）
- 室温下孵育30min-1h
- 监测Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的荧光强度（底部读取模式）
储备溶液配制
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. CytoCalcein™Red AM储备溶液：
向CytoCalcein™Red AM小瓶（组分A）中加入20 µL DMSO（组分B），并充分混合以制成CytoCalcein™Red AM储备液。 注意：20 µL CytoCalcein™Red AM储备液足以装满一块板。 避光。 为了存放，请将管子紧紧密封。 注意：如果试管密封严密，可将未使用的CytoCalcein™Red储备液分装并在<-20℃下保存1个月。 避免重复冻融循环。
工作溶液配制
将全部内容物（20 µL）的CytoCalcein™Red AM储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分C）中，并充分混合以制成CytoCalcein™Red AM工作溶液。 注意：此CytoCalcein™Red AM工作溶液不稳定，请立即使用。 注意：如果这些细胞（例如CHO细胞）含有会导致荧光染料随时间泄漏的有机阴离子转运蛋白，则应准备丙磺舒储备溶液并以孔内工作浓度1加入到缓冲液中 -2.5毫米 分装并保存未使用的丙磺舒储备溶液于≤-20 ℃。
操作步骤
- 根据需要用测试化合物处理细胞。 注意：添加化合物之前不必洗涤细胞。 但是，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在添加化合物之前将生长培养基和血清因子吸掉。 加入100 µL /孔（96孔板）和25 µL /孔（384孔板）的1X Hank盐溶液和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或抽吸后选择的缓冲液。 或者，细胞可以在无血清培养基中生长。
- 去除生长培养基
- 加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的CytoCalcein™Red AM工作溶液。
- 在避光的条件下，在室温或37°C下孵育板30分钟至1小时。 注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。 对于非贴壁细胞，建议在孵育后以800 rpm的速度离心细胞板2分钟。
- 使用荧光酶标仪（底部读取模式）在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）下监控荧光强度。
数据分析
从空白标准孔获得的读数（RFU）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值即可得到基线校正值。 然后，绘制标准读数，以获得标准曲线和方程式。 此方程式可用于计算HeLa细胞样品。 我们建议您使用在线线性回归计算器，该计算器可在以下网址找到：https://www.aatbio.com/tools/linear-logarithmic-semi-log-regression-online-calculator
参考文献
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Authors: Hattan A Alharbi, Jane Alcorn, Ahmed Al-Mousa, John P Giesy, Steve B Wiseman
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