Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞凋亡的试剂盒，Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒是通过测量Caspase 9的活性而用于细胞凋亡检测的。Caspase 9是CED-3亚家族中的一员。活化的Caspase 9能切割下游caspases,例如caspase-3,-6和-7，起始caspase级联反应。在正常发育的神经系统中，活化的Caspase 9是凋亡所必需的。Caspase 9已证明具有底物的选择性，其基序为Leu-Glu-His-Asp (LEHD)。本试剂盒利用(Ac-IETD)2-R110作为荧光指示器来检测caspas-9的活性。通过caspas-9的切割R110肽产生强绿色荧光，其发射光在520 nm和530 nm之间，激发光为480 nm和500 nm·之间。本试剂盒提供所有必需组分和操作流程。该实验结果稳定，快速且适应高通量筛选。它不仅能够定量凋亡细胞中caspas-9的活性还能筛选caspas-9的抑制剂。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒。 

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荧光酶标仪
Ex:	490 nm
Em：	525 nm
Cutoff：	515 nm
推荐孔板:	黑色透明底板
读取模式:	顶/底读模式

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物制备细胞
2.加入等体积的Caspase 9工作溶液
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.在Ex / Em = 490 / 525nm处监测荧光

 

工作溶液配制

将50μLCaspase9底物（组分A）加入10mL测定缓冲液（组分B）中并充分混合。

 

操作步骤

1.通过将10μL/孔的10X测试化合物（96孔板）或5μL/孔的5X测试化合物（384孔板）加入PBS或所需缓冲液中来处理细胞。 对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相同量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在5％CO 2,37℃培养箱中孵育所需的一段时间以诱导细胞凋亡。

3.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的半胱天冬酶9工作溶液。

4.将工作溶液板在室温下孵育至少1小时，避光。 注意：如果需要，在室温下加入测定加样溶液10分钟前，向选定的样品中加入1μL的1 mM Ac-LEHD-CHO caspase 9抑制剂，以确认对caspase 9样活性的抑制。

5.将细胞板（特别是非贴壁细胞）以800rpm离心2分钟（关闭制动器）。

6.监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度

 

数据分析

图1.使用Jurkat细胞中的Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒检测caspase 9活性。 将Jurkat细胞以200,000个细胞/90μL/孔接种在Costar黑色壁/透明底96孔板中。 用10mM腺苷处理细胞48小时，而未处理的细胞用作对照。 加入半胱天冬酶9测定加载溶液（100μL/孔）并在室温下温育1小时。 使用FlexStation 酶标仪（Molecular Devices）在Ex / Em = 490 / 525nm下测量荧光强度。

 

参考文献

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