Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 蓝色荧光 405nm激发
Ex (nm) | 406 | Em (nm) | 445 |
分子量 | - | 溶剂 | - |
存储条件 | - |
Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞凋亡的试剂盒,我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。有多种参数可用于检测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸(PS)的转运来监测细胞凋亡。在凋亡中,PS转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡初始/中间阶段的普遍指标,可以在观察到形态变化之前进行检测。该试剂盒使用与PS特异性结合的荧光膜联蛋白V。已经证明膜联蛋白V缀合物选择性结合PS,使用带有Pacific Blue滤波片的流式细胞仪,对该特定的测定试剂盒进行了优化,以监测细胞凋亡。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒。
适用仪器
流式细胞仪 | |
Ex: | 405 nm |
Em: | 450/40 nm |
通道: | Pacific Blue 通道 |
荧光显微镜 |
|
Ex: | DAPI 滤波片组 |
Em: | DAPI 滤波片组 |
推荐孔板: | 黑色透明底板 |
样品实验方案
简要概述
1.用测试化合物(200μL/样品)制备细胞
2.添加Annexin V-mFluor Violet 450检测溶液
3.在室温下孵育30-60分钟
4.使用具有Ex / Em = 405 / 450nm滤光器组的流式细胞仪或具有Violet滤光器的荧光显微镜分析细胞
操作步骤
使用膜联蛋白V-mFluor Violet 450制备和孵育细胞:
1.用测试化合物处理细胞一段所需的时间(用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时)以细胞凋亡。
2.离心细胞,得到1-5×105个细胞/管。
3.将细胞重悬于200μL测定缓冲液(组分B)中。
4.将2μL膜联蛋白V-mFluor Violet 450(组分A)加入细胞中。
5.可选:将2μL100X碘化丙啶(组分C)加入细胞中,用于坏死细胞。
6.在室温下孵育30至60分钟,避光。
7.在使用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,添加300μL分析缓冲液(组分B)以增加体积。
8.使用具有Ex / Em = 405 / 450nm滤光片组的流式细胞仪或具有Violet滤光片的荧光显微镜监测荧光强度。
使用流式细胞仪分析:
1.使用流式细胞仪在Ex / Em = 405 / 450nm处定量膜联蛋白V-mFluor Violet 450结合。 当碘化丙啶加入细胞时,使用FL2通道测量细胞活力。 注意:粘附细胞上的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经常检测,因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。 然而,Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。
使用荧光显微镜分析:
1.孵育后移取细胞悬液,用测定缓冲液冲洗1-2次,然后用测定缓冲液重悬细胞。
2.将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。 注意:对于粘附细胞,建议直接在盖玻片上生长细胞。 与V-mFluor Violet 450孵育后,用测定缓冲液冲洗1-2次,并将化验缓冲液加回到盖玻片中。 在玻璃载玻片上翻转盖玻片并可视化细胞。 在与V-mFluor Violet 450一起温育后,细胞也可以固定在2%甲醛中,并在显微镜下观察。
3.使用Violet通道在荧光显微镜下用V-mFluor Violet 450分析凋亡细胞。 当碘化丙啶加入细胞时,使用TRITC通道测量细胞活力。 质膜上的蓝色染色表明V-mFluor Violet 450与细胞表面上的PS结合。
数据分析
在活的非凋亡细胞中,膜联蛋白V-mFluor Violet 450检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡,其通常为所有细胞的2-6%。 在凋亡细胞中,膜联蛋白V-mFluor Violet 450与磷脂酰丝氨酸结合,磷脂酰丝氨酸位于细胞膜的外部小叶上,导致染色强度增加。
图1.在Jurkat细胞中检测膜联蛋白V-mFluor Violet 450和磷脂酰丝氨酸的结合活性。 将Jurkat细胞在37℃,5%CO2培养箱中在没有(蓝色)或1μM星形孢菌素(红色)的情况下处理5小时,然后用Annexin V-mFluor Violet 450染色30分钟。 使用FACSCalibur(Becton Dickinson)流式细胞仪,使用紫外激光在Ex / Em = 405 / 450nm下测量膜联蛋白V-mFluor Violet 450的荧光强度。 |
参考文献
In situ polymerizable hydrogel incorporated with specific pathogen-free porcine platelet-rich plasma for the reconstruction of the corneal endothelium
Authors: Yung-Kai Lin, Ruchi Sharma, Hsu Ma, Wen-Shyan Chen, Chao-Ling Yao
Journal: Journal of the Taiwan Institute of Chemical Engineers (2017)
Novel regulations of MEF2-A, MEF2-D, and CACNA1S in the functional incompetence of adipose-derived mesenchymal stem cells by induced indoxyl sulfate in chronic kidney disease
Authors: Duyen Thi Do, Nam Nhut Phan, Chih-Yang Wang, Zhengda Sun, Yen-Chang Lin
Journal: Cytotechnology (2016): 2589--2604
Shear stress-induced alteration of epithelial organization in human renal tubular cells
Authors: Damien Maggiorani, Romain Dissard, Marcy Belloy, Jean-Sébastien Saulnier-Blache, Audrey Casemayou, Laure Ducasse, Sandra Grès, Julie Bellière, Cécile Caubet, Jean-Loup Bascands
Journal: PloS one (2015): e0131416
Targeting a G-protein-coupled receptor overexpressed in endocrine tumors by magnetic nanoparticles to induce cell death
Authors: Claire Sanchez, Darine El Hajj Diab, Vincent Connord, Pascal Clerc, Etienne Meunier, Bernard Pipy, Bruno Payré, Reasmey P Tan, Michel Gougeon, Julian Carrey
Journal: Acs Nano (2014): 1350--1363
相关产品
产品名称 | 货号 |
Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 橙色荧光 405nm激发 | Cat#22830 |
Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 绿色荧光 405nm激发 | Cat#22829 |
Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 绿色荧光 适合流式细胞检测 | Cat#22824 |