酪朊酸,FITC标记
| Ex (nm) | 491 | Em (nm) | 516 |
| 分子量 | N/A | 溶剂 | Water |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
酪朊酸,FITC标记是美国AAT Bioquest生产的荧光染料，酪蛋白被认为是通用的蛋白酶底物，经蛋白酶催化所得产物具有很宽的光谱范围。由于这种本身就具有荧光特征的酪蛋白可以被许多蛋白酶水解，因此它们广泛地用于荧光测定法检测蛋白酶活性的试验中。作为一个完整的底物，酪蛋白上带着5-FITC标签，具有显著的荧光淬灭效果。经过蛋白酶催化水解，释放其淬灭效果，产生明亮的绿色荧光染料所标记的短肽；这种荧光强度的增加与蛋白酶的活性成直接的比例关系。我们不推荐将这种偶联物用于荧光偏振分析。在荧光偏振分析中我们可以使用常规的荧光素标记的酪蛋白偶联物。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的酪朊酸,FITC标记。
样品实验方案
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
酪蛋白，FITC共轭原液：
在PBS缓冲液中制成5-10 mg / mL酪蛋白，FITC偶联的原液。
2.工作溶液
酪蛋白FITC共轭工作溶液（2X）：
将FITC偶联的原液以100-400μg/ mL的浓度稀释至50-100 mM Tris缓冲液（pH 7.4）中。 2X Assay工作溶液设计用于检测胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，嗜热菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和人白细胞弹性蛋白酶的活性。 对于其他蛋白酶，请参考表1中合适的测定缓冲液配方。 对于每种蛋白酶，应通过实验确定测定工作溶液的佳浓度。
样品操作及分析
1.将等体积的胰蛋白酶标准品或样品与2X Assay工作溶液混合。
2.在Ex / Em = 490/525 nm处监控荧光的增加。
2.1 对于动力学读数：立即开始连续连续测量荧光强度，并每5分钟记录一次数据，持续30分钟。
2.2 对于终点读数：在避光的条件下，将反应在所需温度下孵育30至60分钟。 然后测量荧光强度。
表1.测定工作溶液的适当测定缓冲液配方
| 蛋白酶 | 1x 分析缓冲液 |
| 组织蛋白酶D | 20 mM柠檬酸钠，pH 3.0 |
| 木瓜蛋白酶 | 20 mM乙酸钠，20 mM半胱氨酸，2 mM EDTA，pH 6.5 |
| PAE | 20 mM磷酸钠，pH 8.0 |
| 胃蛋白酶 | 10 mM HCl，pH 2.0 |
| 猪胰弹性蛋白酶 | 10 mM Tris-HCl，pH 8.8 |
| 枯草杆菌 | 20 mM磷酸钾缓冲液，pH 7.6，150 mM NaCl |
参考文献
Liquid temperature measurement method in microchannels by using fluorescence polarization
Authors: Kazuya Tatsumi, Chi Hsuan Hsu, Atsushi Suzuki, Kazuyoshi Nakabe
Journal: Heat and Mass Transfer (2017): 1--10
Micro-scale temperature measurement method using fluorescence polarization
Authors: K Tatsumi, CH Hsu, A Suzuki, K Nakabe
Journal: (2016): 032097
Microscopic Fluid Temperature Measurements Using Fluorescence Polarization Method
Authors: Kazuya Tatsumi, Akihisa Tozaki, Kazuyoshi Nakabe
Journal: (2011): T10167--T10167
