钙离子荧光探针CalGreen1AM

Cal Green 1 (AAT Bioquest) 与 Calcium Green-1 (Invitrogen) 是同一分子。它在与钙离子结合后，荧光会大幅度增加。细胞渗透性染料 Cal Green 1 AM (Calcium Green-1 AM) 是一种 488 nm 可激发的钙指示剂。与 Fluo-3 AM 相比，Cal Green-1 AM 在细胞中低钙浓度下荧光更强，有助于确定基线钙水平并提高静息细胞的可见度。它已用于许多钙信号传导研究，包括测量细胞内钙、钙流入和释放后以及活体组织中钙的多光子激发成像。通过将溶解的指示剂直接添加到培养基中培养的细胞中，可以向细胞装载 Cal Green-1 AM。来自这些细胞的荧光信号通常使用荧光显微镜、荧光酶标仪或流式细胞术来检测。

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适用仪器

溶解方案(溶剂以说明书为准)

样品实验方案

储备溶液配制:

除非另有说明，所有未使用的储备溶液应分成一次性等份，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。

Cal Green 1 AM 储备溶液

在高品质无水 DMSO 中制备 2 至 5 mM Cal Green 1 AM 储备溶液。

工作溶液配制:

Cal Green 1 AM 工作溶液

1.实验当天，将 Cal Green 1 AM 溶解在 DMSO 中，或将等份指示剂储备溶液解冻至室温。

2.在您选择的缓冲液（例如 Hanks 和 Hepes 缓冲液）中用 0.04% Pluronic® F-127 制备 2 至 20 µM Cal Green 1 AM 工作溶液。对于大多数细胞系，建议终浓度为 4-5 μM 的 Cal Green  1 AM。细胞加载所需染料的准确浓度必须根据经验确定。

注意：非离子洗涤剂 Pluronic® F-127 有时用于增加 Cal Green™ 1 AM 的水溶性。可以从百萤购买各种 Pluronic® F-127

注意：如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中（孔中的最终浓度为 0.5-1 mM），以减少脱酯后染料的外漏。各种 ReadiUse 丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，均可从百萤购买。

操作步骤

以下是我们推荐的将 AM 酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指导，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.在生长培养基中将细胞孵育过夜。

2.第二天，将 1X Cal Green 1 AM 工作溶液添加到您的细胞培养板中。

3.将载有染料的板在细胞培养箱中于 37°C 下孵育 30 至 60 分钟。

注意：孵育染料超过 1 小时可以提高某些细胞系的信号强度。

4.用 HHBS 或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，例如 1 mM 丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除任何多余的探针。

5.根据需要添加刺激剂，同时使用配备 FITC 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（例如 FDSS、FLIPR 或 FlexStation）的荧光酶标仪在 Ex/Em = 490/525 nm 处测量荧光。

试剂应用文献

参考文献