Buccutite PE-Texas Red抗体标记试剂盒 标记25ug抗体

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产品优势  

高效偶联：采用优化的偶联方法，确保染料和抗体的高效结合，减少未标记抗体和过度标记的情况

 

适用范围

主要用于标记抗体 

 

产品介绍

PE-Texas Red是流式细胞术中常用的荧光染料，其最大吸收峰为565 nm，发射峰为600 nm。AAT Bioquest公司推出的Buccutite™快速标记试剂盒可高效实现PE-Texas Red串联染料与抗体及链霉亲和素等蛋白的偶联。

Buccutite™ PE-Texas Red偶联试剂盒提供了一种稳定便捷的抗体-PE偶联方案。该试剂盒包含预活化PE和反应缓冲液，仅需两步混合操作即可完成标记，且无需纯化步骤。所得偶联抗体可应用于流式细胞术、蛋白质印迹、ELISA及免疫组化等实验。每个试剂盒可满足2次标记反应，每次最多可标记25 μg抗体。

本试剂盒采用预活化PE-Texas Red串联染料，可高效偶联抗体、链霉亲和素及二抗等蛋白。与传统SMCC化学偶联法相比，预活化PE-Texas Red即用型能显著提高产率。此外，我们的预活化PE-Texas Red通过蛋白质中丰富的氨基基团进行偶联，而SMCC法则需通过还原抗体再生巯基才能实现偶联。

 

注意事项

1.由于PE分子量较大（240 kDa），每次标记反应中抗体的用量必须少于PE用量；

2.通常每50 μg PE对应25 μg IgG抗体时可获得理想效果，但是针对不同抗体，建议通过预实验确定最佳标记比例；

实验方案

1.向25µl抗体溶液中加入1.25 µl反应缓冲液（组分C）

2.抗体混合液加入Buccutite™ MTA冻干粉（组分B）

3.室温孵育30分钟

4.加入50 µl Buccutite™ FOL活化PE-Texas Red（组分A）

5.室温继续孵育60分钟

 

重要保存说明：

1.试剂盒需4℃保存（有效期6个月），组分B可-20℃冻存

2.禁止冷冻组分A（活化PE-Texas Red）与组分C（反应缓冲液）

3.使用前需室温平衡所有组分，短暂离心后立即配制工作液

注：本方案以标记羊抗小鼠IgG抗体为例。

 

抗体工作液配制

抗体浓度1 mg/mL时

取25 μL抗体溶液（含25 μg抗体）加入1.25 μL反应缓冲液（组分C，占总反应体积5%）

 

注意事项

1.浓度调整：若抗体浓度≠1 mg/mL，需调整体积确保投入~100 μg抗体

2.抗体应溶解在1X磷酸盐缓冲盐水（PBS），pH 7.2-7.4；如果抗体溶解在甘氨酸缓冲液中，必须用1X PBS，pH 7.2-7.4透析，或者使用ReadiUse™ 10KD离心过滤器（Cat. # 60502 from AAT Bioquest）去除游离胺或铵盐（如硫酸铵和乙酸铵）   

3.避免含BSA/明胶的抗体 

4.抗体浓度<1 mg/mL会显著降低Buccutite™ MTA反应效率

5.推荐工作浓度1-10 mg/mL

 

Buccutite™ MTA工作液配制

向Buccutite™ MTA（组分B）的小瓶中加入10 µLDMSO（DMSO,本品未提供）。

 

Buccutite™ FOL活化PE-Texas Red工作液配制

向Buccutite™ FOL活化PE-Texas Red（组分A）的小瓶中加入50 µL ddH2O

 

抗体-Buccutite™ MTA反应步骤

1.将抗体工作液直接加入Buccutite™ MTA（组分B）管中，通过反复吹吸或短暂涡旋（约5-10秒）充分混匀

2.室温（25±2℃）静置反应30-60分钟

注：可根据需求延长旋转或振荡孵育时间

 

抗体-PE-Texas Red偶联制备

1.加入Buccutite™ FOL活化PE-Texas Red工作液与抗体，通过过反复吸吹几次或漩涡振荡几秒钟来充分混合。

2.培养1-2小时

3.抗体-PE-Texas Red偶联物现已准备好使用

注：如需立即使用，抗体-PE-Texas Red偶联物需要稀释到您选择的缓冲液中。 

 

抗体-PE-Texas Red偶联物保存

浓度要求：≥0.5 mg/mL（需添加0.1% BSA等载体蛋白）

短期保存：4℃避光（含2 mM叠氮钠可稳定2个月）

长期保存：冻干后≤-20℃储存

 

注意事项

避免反复冻融

使用前需离心去除潜在沉淀