Buccutite PE-Cy7抗体标记试剂盒 标记100ug抗体

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产品优势  

高效偶联：采用优化的偶联方法，确保染料和抗体的高效结合，减少未标记抗体和过度标记的情况

 

适用范围

主要用于标记抗体 

 

产品介绍

PE-Cy7是流式细胞术中常用的串联荧光染料，其主吸收峰位于565 nm，发射峰约780 nm，AAT Bioquest公司推出的Buccutite™ PE-Cy7快速偶联试剂盒可高效实现该染料与抗体及链霉亲和素等蛋白的偶联，试剂盒包含预活化PE和反应缓冲液，每次反应最多可标记100 μg抗体（每盒可完成2次标记）。该预活化PE-Cy7试剂通过蛋白质中丰富的氨基基团直接偶联，相比传统SMCC化学法（需还原抗体再生巯基）具有产率高、操作简便的优势，偶联产物可应用于流式细胞术、蛋白质印迹（WB）、ELISA及免疫组化（IHC）等检测。

 

注意事项

1.由于PE分子量较大（240 kDa），每次标记反应中抗体的用量必须少于PE用量；

2.通常每100 μg PE对应50-60 μg IgG抗体时可获得理想效果，但是针对不同抗体，建议通过预实验确定最佳标记比例

实验方案

1.向100 µl抗体溶液中加入5 µl反应缓冲液（组分C）

2.抗体混合液加入Buccutite™ MTA冻干粉（组分B）

3.室温孵育30分钟

4.加入50 µl Buccutite™ FOL活化PE-Cy7（组分A）

5.室温继续孵育60分钟

 

重要保存说明：

1.试剂盒需4℃保存（有效期6个月），组分B可-20℃冻存

2.禁止冷冻组分A（活化PE-Cy7）与组分C（反应缓冲液）

3.使用前需室温平衡所有组分，短暂离心后立即配制工作液

注：本方案以标记羊抗小鼠IgG抗体为例。

 

抗体工作液配制

抗体浓度1 mg/mL时

取100 μL抗体溶液（含100 μg抗体）加入5 μL反应缓冲液（组分C，占总反应体积5%）

 

注意事项

1.浓度调整：若抗体浓度≠1 mg/mL，需调整体积确保投入~100 μg抗体

2.抗体应溶解在1X磷酸盐缓冲盐水（PBS），pH 7.2-7.4；如果抗体溶解在甘氨酸缓冲液中，必须用1X PBS，pH 7.2-7.4透析，或者使用ReadiUse™ 10KD离心过滤器（Cat. # 60502 from AAT Bioquest）去除游离胺或铵盐（如硫酸铵和乙酸铵）   

3.避免含BSA/明胶的抗体 

4.抗体浓度<1 mg/mL会显著降低Buccutite™ MTA反应效率

5.推荐工作浓度1-10 mg/mL

 

抗体-Buccutite™ MTA反应步骤

1.将抗体工作液直接加入Buccutite™ MTA（组分B）管中，通过反复吹吸或短暂涡旋（约5-10秒）充分混匀

2.室温（25±2℃）静置反应30-60分钟

注：可根据需求延长旋转或振荡孵育时间

 

抗体-PE-Cy7偶联制备

1.向Buccutite™ FOL活化PE-Cy7（组分A）管中加入50 μL超纯水（ddH₂O），吹吸或涡旋混匀至完全溶解

2.将全部复溶PE-Cy7溶液加入抗体-MTA反应，室温旋转混合反应1小时

3.抗体-PE-Cy7偶联物现已准备好使用

注：如需立即使用，抗体-PE-Cy7偶联物需要稀释到您选择的缓冲液中。 

 

抗体-PE-Cy7偶联物保存

浓度要求：≥0.5 mg/mL（需添加0.1% BSA等载体蛋白）

短期保存：4℃避光（含2 mM叠氮钠可稳定2个月）

长期保存：冻干后≤-20℃储存

 

注意事项

避免反复冻融

使用前需离心去除潜在沉淀